交泰丸對鏈脲佐菌素性糖尿病大鼠視網(wǎng)膜微血管病變作用的研究.pdf

1、目的：糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是糖尿病(DM)最為常見和最為嚴重的并發(fā)癥之一，已成為西方國家首要的致盲眼病。在我國DM和DR患病率也逐步提高。目前有關DR的發(fā)病機制尚未完全闡明，各種治療方法尚不理想。因此開展對早期DR的中醫(yī)藥防治研究，有重要意義。古代醫(yī)家注重從心、腎二臟探討DM的病因病機及論治。久病及腎、陰損及陽，寒熱并見、虛實夾雜是DM的病機特點，已成近代醫(yī)家共識。交泰丸是由黃連、肉桂組成的名方，具有交通心腎功效，原方主治心悸、失眠

2、，證屬心火亢盛為主、腎陽虧虛為輔的心腎不交者。方中黃連性寒，歸心經(jīng)，擅清心火，治療眼病以及DM歷史悠久；肉桂性溫，歸腎經(jīng)，擅溫腎陽，現(xiàn)代研究也有防治DM的作用?！　煾呓∩芯繂T結合自己長期臨證經(jīng)驗，進一步提出以下認識：DR除了具備從陰虛向氣陰兩虛再向陰陽兩虛轉化的證候演變特點、全身兼有血瘀證外，心腎不交、心火上亢擾目也是不容忽視的重要病機之一。即腎陽虛氣化功能不足，腎水不能上行以抑心火，導致心火獨亢。因目為心使，目又為心之外竅，且

3、心主血脈。故心火亢盛，上擾目竅，則目內血脈變生DR各種特有的血管病變，包括微血管瘤、出血、硬性滲出、棉絮斑、視網(wǎng)膜內微血管異常、靜脈串珠、黃斑水腫、黃斑缺血、新生血管形成及纖維增生等；交泰丸能有效防治心腎不交、心火上亢型DR。交泰丸所治之心腎不交，病變重點在心火。方中君藥黃連清心火，心火不亢，則邪不犯目，目內血脈自安。佐藥肉桂溫腎陽，腎陽得復則血脈瘀阻自可改善?！　〗惶┩栌糜诜乐蜠R的初步臨床觀察顯示，有助于增強治療效果，同時也有助于

4、更好地控制血糖。故進行交泰丸防治鏈脲佐菌素(STZ)性DM大鼠視網(wǎng)膜微血管病變的實驗研究，以期了解交泰丸對DR的作用及機制，為DR的辨證論治提供一種新的思路和方法?！　『宿D錄因子κB(NF-κB)被視為DM微血管病變的中心調節(jié)因子，NF-κB的激活被認為在DM血管并發(fā)癥尤其是視網(wǎng)膜病變中起重要作用，與DR的早期損害及以后新生血管形成有重要關系。內皮素(ET)和一氧化氮(NO)是最強的內源性血管收縮和舒張因子，系相互拮抗的兩種血管活性物

5、質，共同形成基本作用相反的血管內在自身調節(jié)平衡系統(tǒng)。DM狀態(tài)下這一自穩(wěn)平衡調節(jié)系統(tǒng)破壞，ET增加和NO釋放減少，可導致血管舒縮功能失調、血小板凝聚和內皮細胞增生，加速或促進DR的發(fā)展。因此我們在實驗中重點觀察了交泰丸對STZ性DM大鼠視網(wǎng)膜、視網(wǎng)膜血管NF-κB，血漿及視網(wǎng)膜ET和NO相關指標的影響。 方法：Wistar大鼠200只。185只STZ腹腔注射建立DM模型?？崭寡恰?6.7mmol/L者視為DM造模成功大鼠。造模3

6、月后，將存活的DM造模成功大鼠隨機分為5組。加上正常對照組一共6組，分別為：正常對照組(1組)；模型對照組即陰性對照組(2組)；多貝斯對照組即陽性對照組(3組)；交泰丸高劑量組(4組)；交泰丸中劑量組(5組)和交泰丸低劑量組(6組)?！　》纸M后開始給藥，每日灌胃一次，連續(xù)給藥3-4月。每月測一次體重，測一次空腹血糖，記錄一次白內障的有無及程度。給藥3月后隨機取第一批大鼠42只，檢測血漿ET和血清NO。眼球壁石蠟切片HE染色，觀察視網(wǎng)膜

7、神經(jīng)上皮層、色素上皮層和脈絡膜的病理改變，并行免疫組化染色，計算機圖像分析，觀察NF-κB、神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)、血管內皮生長因子(VEGF)、細胞間黏附分子-1(ICAM-1)在視網(wǎng)膜的表達。視網(wǎng)膜血管消化鋪片PAS染色，計數(shù)內皮細胞和周細胞比值，觀察內皮細胞凋亡和無細胞毛細血管的有無及輕重程度。視網(wǎng)膜血管消化鋪片免疫組化染色，計算機圖像分析，觀察NF-κB在視網(wǎng)膜血管的表達。給藥4月后第二批大鼠共54只，檢測血漿組織型纖溶

8、酶原激活因子(t-PA)、纖溶酶原激活因子的抑制物(PAI)及D-二聚體(DD)。實時熒光定量逆轉錄聚合酶聯(lián)反應測定視網(wǎng)膜內皮素ET-1、ET-3、ETA受體、ETB受體，nNOS、誘生型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表達。兩批大鼠均檢測糖化血清蛋白(GSP)，并行胰腺石蠟切片HE染色及免疫組化染色觀察。 結果：一般狀況，重造模3月后，2-6組大鼠體重均較1組顯著降低(P＜0.05)。用藥后3、4月，5、6組體重較1組已經(jīng)無

9、明顯降低(P＞0.05)，而2、3、4組仍顯著降低(P＜0.05，血糖從造模后3月直至用藥后各期，同1組相比，2-6組血糖、GSP水平皆顯著升高(P＜0.05)，而2-6各組之間無顯著性差異(P＞0.05)。但5組血糖和GSP在用藥后有下降趨勢。1.3白內障造模后3月，同1組相比，其余各組皆發(fā)生明顯白內障(P＜0.05)，而2-6各組之間無顯著性差異(P＞0.05)；用藥后3、4月，5組白內障程度較2組明顯減輕(P＜0.05；血漿纖溶活

10、性，t-PA與1組和2組比較，3、4、5組大鼠血漿t-PA升高均有顯著性差異(P＜0.05)，PAI與2組比較，其余各組大鼠血漿PAI降低均有顯著性差異(P＜0.05)。與1組比較，僅4、5組無顯著性差異(P＞0.05)，DD1組和2組血漿DD無顯著性差異(P＞0.05)；血漿ET和血清NO，血漿ET與1組比較，除5組外，2、3、4、6組血漿ET降低均有顯著性意義(P＜0.05)。且5組較2、3、4組血漿ET升高有顯著性意義(P＜0.0

11、5)，血清NO與1組比較，2和3組血清NO升高有顯著性意義(P＜0.05)，而4、5、6組無顯著升高(P＞0.05)；胰腺及眼球壁HE染色形態(tài)學觀察，胰島、視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮、色素上皮、脈絡膜，2組大鼠均可見典型的DM病理學改變，而5、6組尤其是5組病變大多明顯減輕；視網(wǎng)膜NF-κB、nNOS、VEGF、ICAM-1表達的定量分析，NF-κB與1組比較，2-6組大鼠視網(wǎng)膜中NF-κB表達升高均有顯著性差異(P＜0.05)。同2組比較，5、6

12、、4組表達減少，差異有顯著性(P＜0.05)，nNOS與1組比較，2、3、4、6組大鼠視網(wǎng)膜中nNOS表達升高均有顯著性差異(P＜0.05)，而5組無顯著升高(P＞0.05)，VEGF與1組比較，3、2、4組大鼠視網(wǎng)膜中VEGF表達減少均有顯著性差異(P＜0.05)，而5、6組無顯著減少(P＞0.05)，且5組較3、2、4組表達增加，6組較3組表達增加，差異均有顯著性意義(P＜0.05)，ICAM-1與1組比較，2、3、4組大鼠視網(wǎng)膜中

13、ICAM-1表達顯著減少(P＜0.05)，而5、6組無顯著減少(P＞0.05)，且5組較2組表達顯著升高(P＜0.05)；視網(wǎng)膜血管消化鋪片PAS染色形態(tài)學觀察，2組大鼠可見視網(wǎng)膜毛細血管管徑粗細不一，血管排列紊亂，內皮細胞增生，周細胞減少。內皮細胞及周細胞凋亡，核固縮，凋亡小體形成；小動脈閉塞，無細胞毛細血管形成。5組和6組病變明顯減輕，與1組比較，2、4組大鼠視網(wǎng)膜血管內皮細胞凋亡發(fā)生有顯著性差異(P＜0.05)，而5、6、3組無顯

14、著差異(P＞0.05)。同2組比較，5、6組內皮細胞凋亡減輕，差異有顯著性(P＜0.05)，與1組比較，2、3、4組大鼠視網(wǎng)膜無細胞毛細血管形成均有顯著性差異(P＜0.05)，而5、6組無顯著性差異(P＞0.05)；視網(wǎng)膜血管消化鋪片NF-κB表達的定量分析，與1組比較，3、2組大鼠視網(wǎng)膜血管消化鋪片中NF-κB表達顯著升高(P＜0.05)，而4、5、6組無顯著升高(P＞0.05)；視網(wǎng)膜ET系統(tǒng)和NOS系統(tǒng)檢測，ET-1與1組比較，2

15、、4組大鼠視網(wǎng)膜中ET-1mRNA表達均顯著升高(P＜0.05)，而3、5、6組無顯著差異(P＞0.05)。與2組比較，3、5組大鼠視網(wǎng)膜中ET-1mRNA表達均顯著降低(P＜0.05)，ETA與1組比較，2組大鼠視網(wǎng)膜中ETA受體mRNA表達顯著升高(P＜0.05)，而3-6組無顯著升高(P＞0.05)。與2組比較，3-6組大鼠視網(wǎng)膜中ETA受體mRNA表達均顯著降低(P＜0.05)，ETB與1組比較，2組大鼠視網(wǎng)膜中ETB受體mRN

16、A表達顯著升高(P＜0.05)，而3-6組無顯著升高(P＞0.05)。與2組比較，3、5、6組大鼠視網(wǎng)膜中ETB受體mRNA表達均顯著降低(P＜0.05)，nNOS與1組比較，2、4組大鼠視網(wǎng)膜中nNOSmRNA表達均顯著降低(P＜0.05)，而3、5、6組無顯著降低(P＞0.05)，ET-3和iNOS視網(wǎng)膜ET-3和iNOSmRNA的表達在1組和2組無顯著性差異(P＞0.05)。 結論：交泰丸中(5組)、低劑量(6組)尤其是中

17、劑量能夠在一定程度上延緩STZ性DM大鼠視網(wǎng)膜微血管病變的發(fā)生發(fā)展。能夠有效抑制視網(wǎng)膜血管內皮細胞凋亡，減輕無細胞毛細血管的形成。機理可能在于明顯降低STZ性DM大鼠視網(wǎng)膜及視網(wǎng)膜毛細血管周細胞NF-κB的表達，從而減輕NF-κB的活化造成的DR早期損害；調節(jié)血液和視網(wǎng)膜中的ET和NO，從而保持血管內在自身調節(jié)平衡系統(tǒng)的穩(wěn)定；調節(jié)視網(wǎng)膜VEGF和ICAM-1的表達，避免其偏離正常；交泰丸能夠改善STZ性DM大鼠的一般狀況，延緩或阻止白內