靶向超聲造影劑介導(dǎo)Gαi2 C-terminal peptide去迷走神經(jīng)治療心房顫動的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　1）研究制備攜Gαi2 C-terminal peptide（Gαi2ctp）靶向超聲造影劑的可行性；
　　2）建立犬迷走神經(jīng)介導(dǎo)的陣發(fā)性房顫的動物模型，探討迷走神經(jīng)興奮對心房不同部位電生理特性以及房顫誘發(fā)和維持的影響；通過研究靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)Gαi2ctp去迷走神經(jīng)后心房不同部位電生理特征以及房顫誘發(fā)和維持情況的變化，探討去迷走神經(jīng)治療心房顫動的電生理機(jī)制；
　　3）探討靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)Gαi2ctp去迷走神經(jīng)治療心房顫

2、動可能的分子機(jī)制。
　　方法：
　　1）將磺化羅丹明標(biāo)記的Gαi2ctp按照劑量大小分為三組，以聲諾維（SonoVue）為載體，通過直接連接法，制備攜Gαi2ctp靶向超聲微泡造影劑，并檢測三組微泡大小、連接效率、穩(wěn)定性及靶向性。
　　2）健康成年家犬14只（14～23kg）隨機(jī)分為兩組：對照組（n=7），給予單純的超聲微泡造影劑；實(shí)驗(yàn)組（n=7），給予攜Gαi2ctp靶向超聲造影劑。通過頸部迷走神經(jīng)干刺激加快速心房起

3、搏的方法建立迷走神經(jīng)介導(dǎo)的犬急性房顫模型，測定兩組犬心房和肺靜脈不同部位的房顫誘發(fā)率，探討迷走神經(jīng)興奮對房顫誘發(fā)和維持的影響；分別通過心內(nèi)電生理標(biāo)測觀察兩組犬心房和肺靜脈的有效不應(yīng)期（ERP）、ERP離散度（dERP）、ERP頻率適應(yīng)性以及兩組犬心房和肺靜脈不同部位的房顫誘發(fā)率，探討去迷走神經(jīng)治療心房顫動的電生理機(jī)制；
　　3）采用免疫組化和免疫熒光技術(shù)檢測犬心房和肺靜脈不同部位 Gαi2ctp的表達(dá)；采用Western blot

4、的方法測定心房和肺靜脈不同部位Gαi2ctp的蛋白質(zhì)水平的表達(dá)情況；采用 RT-PCR技術(shù)測定實(shí)驗(yàn)組和對照組犬心房和肺靜脈不同部位Gαi2ctp的mRNA的表達(dá)情況的變化；采用ELISA法測定實(shí)驗(yàn)組和對照組犬左心房cAMP含量的變化，探討靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)Gαi2ctp去迷走神經(jīng)治療心房顫動的可能的分子機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1）聲諾維和磺化羅丹明標(biāo)記的Gαi2ctp可以穩(wěn)定結(jié)合，以Gαi2ctp為1.5mg/l的劑量為最佳；制備的造

5、影劑在熒光顯微鏡下可激發(fā)出橙紅色熒光；流式細(xì)胞儀定量檢測結(jié)果顯示，1.5mg/l組Gαi2ctp微泡造影劑在不同靜置時間攜帶率均為最高，靜置0.5小時、1小時、2小時的攜帶率最高，分別是：93.07±4.59％，93.60±7.35%，96.52±3.35%，而且其攜帶率隨時間的延長并未發(fā)生衰減；體內(nèi)評價(jià)發(fā)現(xiàn)熒光顯微鏡下實(shí)驗(yàn)組犬左心房及肺靜脈可見橙紅色熒光，而對照組無熒光物質(zhì)聚集。
　　2）通過頸部迷走神經(jīng)干刺激加心房不同部位快速

6、心房起搏的方法成功制作了迷走神經(jīng)介導(dǎo)的犬急性房顫模型；迷走神經(jīng)刺激可顯著縮短心房及肺靜脈不同部位的ERP，增加dERP，從而增加房顫的誘發(fā)率；與對照組相比較，實(shí)驗(yàn)組左心房靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)Gαi2ctp0.5h、1h、2h后LA、LSPV、LIPV的ERP顯著延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），RA、RSPV、RIPV的ERP輕度延長或縮短，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；實(shí)驗(yàn)組左心房靶向轉(zhuǎn)導(dǎo) Gαi2ctp后心房各部位dERP顯著減少（P＜0.05），

7、ERP頻率適應(yīng)性增加（P＜0.05）；房顫誘發(fā)率下降。
　　3）犬心房及肺靜脈不同部位均存在Gαi2ctp的表達(dá)，靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)外源性的Gαi2ctp可以阻止Gαi介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路，從而影響下游通路中cAMP的含量，減少迷走神經(jīng)介導(dǎo)的房顫發(fā)生。
　　結(jié)論：
　　應(yīng)用直接連接法可以成功制備攜Gαi2ctp靶向超聲微泡造影劑。頸部迷走神經(jīng)干刺激加快速心房起搏可建立迷走神經(jīng)介導(dǎo)的犬急性房顫模型。迷走神經(jīng)電刺激使心房及肺靜脈各部位