四種中藥單體對肝星狀細(xì)胞作用的研究.pdf

1、目的：分離獲取高產(chǎn)量、高活性、高純度的肝星狀細(xì)胞。 方法：用原位膠原酶循環(huán)灌流，密度梯度離心法分離純化大鼠肝星狀細(xì)胞，用含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞并傳代。 結(jié)果：肝星狀細(xì)胞得率為5-6×107個／鼠，純度>97％，存活率>92％。 結(jié)論：分離出的大鼠肝星狀細(xì)胞產(chǎn)量高、活性高、純度高。 目的：以秋水仙堿為對照藥物觀察四種中藥單體對肝星狀細(xì)胞的作用。 方法：采用原位循環(huán)灌流法分離提純肝

2、星狀細(xì)胞(HSC)，經(jīng)鑒定后傳代培養(yǎng)做MTT試驗(yàn)，觀察藥物對HSC活化增殖的影響；流式細(xì)胞儀檢測藥物對HSC增殖周期的影響；丫啶橙(A0)／溴乙錠(EB)熒光染色法測藥物對HSC凋亡的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測藥物對HSC凋亡的影響；免疫細(xì)胞化學(xué)染色法觀察藥物對I、III型膠原蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：上述五種藥物都有抑制傳代HSC活化增殖的作用，以秋水仙堿，丹參素、黃芩甙作用相對明顯；流式細(xì)胞儀分析顯示五種藥物對傳代的HSC增殖周期都

3、有影響，以丹參素、黃芪，黃芩甙相對明顯；流式細(xì)胞儀熒光染色法：發(fā)現(xiàn)丹參素，秋水仙堿，黃芩甙在GO-G1期前出現(xiàn)明顯的亞二倍體峰。A0／EB熒光染色法檢測得出丹參素、黃芩甙，秋水仙堿的細(xì)胞凋亡率高；免疫細(xì)胞化學(xué)染色法分析得出五種藥物對I型膠原表達(dá)抑制明顯，前三位依次是黃芪、丹參素、黃芩甙；對III型膠原表達(dá)抑制明顯，前三位依次是丹參素、黃芪、黃芩甙。 結(jié)論：上述四種中藥單體中以丹參素抑制HSC活化增殖，促進(jìn)凋亡，抑制HSC的III