四種單體成分對前列腺癌和乳腺癌細(xì)胞的作用機(jī)制研究.pdf

1、腫瘤是危害人類健康的難治性多發(fā)病，其危害性僅次于心血管疾病，是導(dǎo)致國內(nèi)人口死亡的第二大原因。由于腫瘤多重耐藥性日益嚴(yán)重，尋找全新結(jié)構(gòu)和作用機(jī)理的抗腫瘤藥物顯得尤為重要。本文分別對天然源的細(xì)梗香草皂苷B(Capilliposide B，CPS-B)、細(xì)梗香草皂苷C（Capilliposide C，CPS-C）和Chalocomoracin(CMR)，以及實驗室合成化合物EM340進(jìn)行了深入地抗腫瘤作用機(jī)制研究。
　　第一部分是關(guān)于天

2、然植物單體化合物CPS-B和CPS-C抗前列腺癌的機(jī)制研究。CPS-B和CPS-C是新型齊墩果烷型三萜皂苷，自植物細(xì)梗香草（Lysimachia capillipes Hemsl，L.capillipes）中分離獲得。前期的體內(nèi)實驗結(jié)果顯示，細(xì)梗香草總皂苷(Lysimachia Capillipes，LC)抗腫瘤作用顯著;但對于其所含單體活性成分CPS-B和CPS-C的抗腫瘤作用機(jī)制還不甚了解。本論文細(xì)胞存活率實驗表明CPS-B和CPS

3、-C對前列腺癌細(xì)胞PC-3和DU145的生長和增殖具有顯著的抑制作用;經(jīng)過48小時作用，CPS-B對PC-3和DU145的半數(shù)抑制濃度分別為3.75μM和4.0μM，CPS-C對PC-3和DU145的半數(shù)抑制濃度分別為5.53μM和9.99μM。以PC-3細(xì)胞為研究對象，探究CPS-B和CPS-C抗前列腺癌作用機(jī)制，實驗結(jié)果顯示CPS-B通過引起細(xì)胞DNA損傷和凋亡，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生活性氧，激活A(yù)MPK-mTOR通路，引起細(xì)胞自噬以及細(xì)

4、胞粘附和轉(zhuǎn)移能力喪失最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡;而CPS-C則通過作用于細(xì)胞線粒體，影響MAPK、Caspase和Bcl-2家族蛋白的表達(dá)而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡性死亡。
　　第二部分是關(guān)于化合物EM340抗乳腺癌的機(jī)制研究。本論文首先以YAP為靶目標(biāo)，通過報告基因法篩選出有效抑制YAP表達(dá)的化合物EM340。進(jìn)一步的實驗結(jié)果顯示，化合物EM340通過激活Hippo信號通路上游的LATS1激酶，引起Hippo通路中心信號蛋白YAP表達(dá)下調(diào)，誘導(dǎo)乳腺癌

5、細(xì)胞的死亡。另一方面，通過阻斷E3泛素化連接酶β-TRCP可有效抑制YAP的下降，說明EM340介導(dǎo)的Hippo信號通路的激活引起了YAP的泛素化降解。采用RT-PCR和qPCR技術(shù)，發(fā)現(xiàn)YAP下游目標(biāo)轉(zhuǎn)錄因子CTGF，Cyr61和干細(xì)胞相關(guān)因子Oct3/4，Sox2，Nanog的表達(dá)被抑制?？傊珽M340以LATS1激酶為靶點作用于Hippo信號通路，進(jìn)而引起Hippo下游效應(yīng)子YAP降解，導(dǎo)致YAP下游目標(biāo)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)下降，最終導(dǎo)

6、致細(xì)胞死亡。
　　第三部分是關(guān)于桑葉中Diels-Alder型化合物Chalocomoracin(CMR)抗前列腺癌和乳腺癌的機(jī)制研究。實驗結(jié)果顯示，CMR引起了PC-3和MDA-MB-231細(xì)胞非凋亡性的細(xì)胞質(zhì)空泡死亡現(xiàn)象（LNCaP細(xì)胞無此現(xiàn)象）。進(jìn)一步的實驗結(jié)果顯示，CMR介導(dǎo)的PC-3和MDA-MB-231細(xì)胞活性氧增加、線粒體膜電位喪失以及鈣離子失衡引起了細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，LC3-Ⅱ、泛素化蛋白以及線粒體效應(yīng)子PINK1的

7、合成，導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生線粒體自噬;另一方面，CMR也引起了類凋亡抑制因子Alix表達(dá)的下調(diào)，提示CMR誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生了類凋亡。對LNCaP在CMR作用下呈現(xiàn)的變化進(jìn)行深入研究發(fā)現(xiàn)，PINK1在CMR介導(dǎo)的細(xì)胞自噬和類凋亡之間扮演著重要的角色。
　　本論文主要的創(chuàng)新性工作如下:
　　(1)首次較深入地研究了CPS-B和CPS-C抗前列腺癌的作用機(jī)制。
　　(2)基于YAP報告基因抗腫瘤化合物篩選，首次證明了EM340是LATS