甲乙煎抑制小鼠H22肝癌血管生成作用的實驗研究.pdf

1、目的：原發(fā)性肝癌(簡稱肝癌)是一種進行性發(fā)展的常見惡性腫瘤，我國為肝癌高發(fā)國家。由于其起病隱匿、惡性程度高、病情變化快、生存期短，患者一旦出現(xiàn)癥狀，病情往往已經(jīng)進入中晚期，預(yù)后極差，危險極大。因此如何改善患者癥狀、延長生存時間、預(yù)防肝癌轉(zhuǎn)移是治療肝癌的關(guān)鍵所在。甲乙煎是我們根據(jù)中醫(yī)基礎(chǔ)理論及臨床上對肝癌的診治體會，并參考王旭高治肝大法和秦伯未《謙齋醫(yī)學講稿》中的用藥經(jīng)驗所組成的方劑。該方在臨床應(yīng)用中取得了較為滿意的療效。本實驗通過建立小

2、鼠肝癌H22淋巴道轉(zhuǎn)移模型，觀察甲乙煎對模型小鼠癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移情況的影響，并進一步探討其作用機制，著重觀察及討論甲乙煎對腫瘤血管形成和瘤組織微血管密度MVD、血管內(nèi)皮生長因子VEGF及其受體fit-4表達的影響，以期為甲乙煎的臨床應(yīng)用提供更加客觀和準確的依據(jù)。 方法： 1 動物分組 SPF級雄性BALB/C小鼠75只，4～6周齡，體重20±2g，隨機分為5組：病理模型對照組，西藥(5-Fu)對照組，甲乙煎小、中

3、、大劑量組，每組各15只。 2 復(fù)制小鼠肝癌H22淋巴道轉(zhuǎn)移模型 復(fù)蘇后的肝癌H22瘤株，注入4～6周齡BALB/C小鼠腹腔內(nèi)，待7.10天后，小鼠腹圍增至最大時，抽取腹水，按文獻方法傳代2.3次。之后，將腹圍增至最大時的荷瘤小鼠，頸椎脫臼法處死，腹腔內(nèi)注射無菌生理鹽水5ml，再用一次性滅菌注射器抽取腹水。將收集的腹水經(jīng)800轉(zhuǎn)/分離心3分鐘，棄上清，計數(shù)，調(diào)整細胞濃度至10<'8>/ml，于各組小鼠左后肢爪墊內(nèi)側(cè)皮下注

4、射瘤細胞懸液O.05mI(5×10<'6>個/ml)。 3 給藥自造模 第2天開始給藥。病理模型對照組以生理鹽水0.3ml/只·天灌胃；西藥(5-Fu)對照組以5-Fu 2.5mg/ml，0.2ml/只·天腹腔注射；甲乙煎小、中、大劑量組分別以甲乙煎1g/ml、2g/ml、4g/ml，0.3ml/只·天灌胃，每日一次，連續(xù)15天。 4 實驗觀察 實驗結(jié)束后第2天，各組小鼠頸椎脫臼法處死，稱重，取脾、胸腺及

5、原發(fā)瘤稱重，計算脾指數(shù)、胸腺指數(shù)，及抑瘤率。HE染色，光鏡下觀察肝癌H22細胞局部侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度。免疫組化SP法染色，觀察局部瘤組織微血管密度MVD和血管內(nèi)皮生長因子VEGF及其受體fit-4表達的情況。 結(jié)果： 1 甲乙煎低、中、高劑量組與病理模型對照組比較，其瘤重均顯著減輕(P<0.01)；甲乙煎高劑量組的瘤重與甲乙煎低劑量組比較亦有顯著減輕(P<0.05)；甲乙煎高劑量組與西藥(5-Fu)對照組比較其瘤重無顯

6、著性差異(P>0.05)。 2 甲乙煎低、中、高劑量組與病理模型對照組相比，其局部瘤組織的侵襲和胭窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度有降低趨勢，其中大劑量組有顯著性差異(P<0.05)；大中劑量組可使胸腺指數(shù)明顯升高(P<0.05)。西藥5-Fu治療組與病理模型對照組相比較，脾指數(shù)明顯降低(P<0.01)，而中藥各治療組則無此副作用。 3 與病理模型對照組相比較，甲乙煎低、中、高劑量組的微血管密度(MVD)均明顯降低(P<0.01)，西藥

7、5-Fu組與病理模型對照組的MVD亦有顯著性差異(P<0.01)。 4 對于VEGF的表達：甲乙煎低、中、高劑量組及西藥5-Fu組均顯著弱于病理模型對照組(P<0.05)。 5 對于flt-4的表達：甲乙煎低、中、高劑量組及西藥5-Fu組均顯著弱于病理模型對照組(P<0.05)。 結(jié)論： 1 甲乙煎可以顯著地抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長，且呈一定的量效趨勢。 2 甲乙煎有減除腫瘤對宿主免疫器官的損害和抑