地塞米松對(duì)小鼠H22肝癌的作用研究.pdf

1、研究背景：
　　原發(fā)性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC），是惡性腫瘤，生存期很短，且發(fā)病率仍在逐年遞增，我國(guó)肝癌患者占世界肝癌病例的一半。糖皮質(zhì)激素（glucocorticoid,GC）是臨床常用的藥物之一，并常作為化療方案中的必要組成。有意思的是，關(guān)于糖皮質(zhì)激素在腫瘤治療中的作用，評(píng)價(jià)卻眾口不一。一般認(rèn)為，糖皮質(zhì)激素可改善腫瘤患者化療中的多種毒副作用，提高患者對(duì)化療的耐受度。吊詭的是，患者對(duì)化療耐受

2、性的提高，往往也意味著腫瘤細(xì)胞對(duì)化療耐藥性的升高。并且，糖皮質(zhì)激素具有很強(qiáng)的免疫抑制作用。傳統(tǒng)的觀念認(rèn)為，免疫系統(tǒng)是機(jī)體抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的重要屏障，糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用不可避免的將抑制機(jī)體的免疫效應(yīng)，消弱免疫系統(tǒng)的這些抗腫瘤的免疫編輯（Immunoediting）作用。不少研究者發(fā)現(xiàn)，糖皮質(zhì)激素具有誘導(dǎo)血液腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，但對(duì)實(shí)體瘤細(xì)胞的凋亡卻有抑制作用，從而影響化療的效果，據(jù)此建議再化療時(shí)不用糖皮質(zhì)激素藥物。
　　免疫反

3、應(yīng)、炎癥與腫瘤之間的關(guān)系非常錯(cuò)綜。與多數(shù)人的觀點(diǎn)相反，腫瘤免疫的發(fā)現(xiàn)者Prehn教授長(zhǎng)期以來(lái)堅(jiān)持免疫反應(yīng)促進(jìn)腫瘤的發(fā)展，因而建議通過(guò)抑制免疫治療腫瘤。從病理學(xué)的角度看，免疫反應(yīng)在組織形態(tài)學(xué)上就是炎癥反應(yīng)。而炎癥對(duì)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展的促進(jìn)作用是舉世公認(rèn)的。有意思的是，上述貌似截然相反的觀點(diǎn)在生物相對(duì)論的原則下得到了統(tǒng)一。
　　生物相對(duì)論認(rèn)為，生物的壽命與繁殖力呈反向關(guān)系。免疫反應(yīng)對(duì)腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用，使腫瘤細(xì)胞的平均生存縮短。在免疫

4、/炎癥和其它環(huán)境應(yīng)激因素的選擇壓力下，腫瘤細(xì)胞必須通過(guò)不斷繁殖來(lái)保證生存。這種微進(jìn)化的結(jié)果就是，壓力越大，腫瘤細(xì)胞的生存期越短，其繁殖力越強(qiáng)，惡性度越高，而患者的生存期越短。
　　從生物相對(duì)論的原則出發(fā)，我們推測(cè)，糖皮質(zhì)激素或可通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的分裂增殖，并減少其向其他器官轉(zhuǎn)移的壓力，從而使患者的生存受益。我們用小鼠的肝癌模型進(jìn)行了初步研究。
　　小鼠Hepa22肝癌模型屬于同種移植模型，引進(jìn)我國(guó)五十多年

5、來(lái)，已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于腫瘤的基礎(chǔ)研究。本研究應(yīng)用小鼠H22腹水型及皮下移植型肝癌模型，觀察地塞米松這一臨床常用的糖皮質(zhì)激素對(duì)H22肝癌的生長(zhǎng)、荷瘤小鼠的生存狀態(tài)及生存期的影響，并進(jìn)一步進(jìn)行地塞米松與化療藥的作用比較，探討化療藥對(duì)小鼠H22肝癌的影響。利用小鼠來(lái)研究其小鼠肝癌，通過(guò)延長(zhǎng)小鼠的代瘤生存期，為地塞米松治療腫瘤、延長(zhǎng)帶瘤生存提供相關(guān)的依據(jù)，并為減少細(xì)胞凋亡而抑制腫瘤生長(zhǎng)的觀點(diǎn)提供直接的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　目的：
　　通過(guò)建

6、立小鼠H22腹水型肝癌模型，觀察地塞米松和5-FU對(duì)小鼠生存期及腹水量的影響。通過(guò)建立小鼠H22皮下移植型肝癌模型，觀察地塞米松和5-FU對(duì)小鼠抑瘤率及生存期的影響。并進(jìn)一步通過(guò)流式細(xì)胞儀和Realtime-PCR，分析地塞米松對(duì)H22腫瘤的細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、糖皮質(zhì)激素受體的表達(dá)的影響。
　　方法：
　　1.建立小鼠H22腹水型肝癌模型，抽取腹水細(xì)胞提總RNA，做逆轉(zhuǎn)錄，PCR擴(kuò)增并進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，檢測(cè)腹水型H22腫瘤

7、細(xì)胞中是否存在糖皮質(zhì)激素受體。
　　2.建立小鼠H22腹水型肝癌模型，選定地塞米松的最佳劑量。
　　3.建立小鼠H22腹水型肝癌模型，檢測(cè)地塞米松對(duì)腹水瘤的影響。
　　4.建立小鼠H22腹水型肝癌模型，進(jìn)行地塞米松不同用藥天數(shù)的效果比較。
　　5.建立小鼠 H22腹水型肝癌模型，抽取兩組小鼠腹水細(xì)胞提總RNA，做逆轉(zhuǎn)錄并進(jìn)行Realtime-PCR，檢測(cè)使用DEX后，H22腹水細(xì)胞中的GCR是上調(diào)，還是下調(diào)。

8、r>　　6.建立小鼠H22腹水型肝癌模型，進(jìn)行5-FU和地塞米松的效果比較。
　　7.流式細(xì)胞儀檢測(cè)DEX與對(duì)照組小鼠腹水細(xì)胞凋亡情況及細(xì)胞周期分布。
　　8.建立小鼠H22皮下移植型肝癌模型，提取瘤塊總RNA，做逆轉(zhuǎn)錄，PCR擴(kuò)增并進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，檢測(cè)皮下移植型瘤塊中是否存在糖皮質(zhì)激素受體。
　　9.建立小鼠H22皮下移植型肝癌模型，觀察地塞米松和5-FU對(duì)移植瘤抑瘤率的影響。
　　10.建立小鼠 H22皮

9、下移植型肝癌模型，提取瘤塊總RNA，做逆轉(zhuǎn)錄并進(jìn)行Realtime-PCR，檢測(cè)使用DEX后，皮下移植型瘤塊中的GCR是上調(diào)，還是下調(diào)。
　　結(jié)果：
　　1.小鼠H22腹水型肝癌的腹水細(xì)胞中存在糖皮質(zhì)激素受體。
　　2.10mg/kg劑量組小鼠的生存期比5mg/kg、1mg/kg、0.5mg/kg劑量組小鼠的生存期長(zhǎng)，腹水量比5mg/kg及0.5mg/kg劑量組小鼠的腹水量少。
　　3.地塞米松組小鼠的生存期比生

10、理鹽水組小鼠的長(zhǎng)，且腹水量少。
　　4.從第5、6天開(kāi)始給藥比從第7、8天開(kāi)始給藥的生存期長(zhǎng)，腹水量少。
　　5.使用地塞米松后，H22腹水細(xì)胞中糖皮質(zhì)激素受體的表達(dá)降低。
　　6. H22腹水型肝癌，地塞米松組和生理鹽水組小鼠的生存期比5-FU組和5-FU+DEX組小鼠的生存期長(zhǎng)，但是腹水量多。
　　7.使用地塞米松后，細(xì)胞凋亡比例減少，處于分裂周期的細(xì)胞比例下降。
　　8.小鼠H22皮下移植型肝癌的瘤塊

11、中存在糖皮質(zhì)激素受體。
　　9.H22皮下移植型肝癌，地塞米松組和生理鹽水組小鼠的生存期均比5-FU組和5-FU+DEX組小鼠的生存期長(zhǎng)，但是瘤塊大。
　　10.使用地塞米松后，H22移植瘤塊中糖皮質(zhì)激素受體的表達(dá)降低。
　　結(jié)論：
　　1.小鼠H22腹水型及移植型肝癌模型的建立非常成功。
　　2.地塞米松可以抑制H22腹水細(xì)胞凋亡，使處于靜止期的細(xì)胞比例增多，處于分裂增殖期的細(xì)胞比例減少。并且，可以下調(diào)H

12、22腫瘤細(xì)胞中糖皮質(zhì)激素受體的表達(dá)。
　　3.地塞米松對(duì)小鼠H22肝癌腹水型腫瘤的生存期有明顯的延長(zhǎng)作用，且早期用藥較晚期用藥效果好。與鹽水組小鼠腫瘤相比，地塞米松組腹水量少，生存狀態(tài)較好。然而，化療藥雖然可以有效抑制腫瘤的生長(zhǎng)，但對(duì)H22腹水型肝癌小鼠的生存期無(wú)作用，甚至?xí)蛊渖嫫诳s短。
　　4.化療藥對(duì)小鼠H22肝癌皮下移植瘤有明顯的抑制作用，但也會(huì)致使小鼠死亡。地塞米松對(duì)小鼠H22肝癌移植瘤雖然無(wú)明顯的抑制作用，但小