重組人血管內皮抑制素抗小鼠肝癌H22作用研究.pdf

1、目的：
　　 觀察重組人血管內皮抑制素(Endostar,恩度)對小鼠肝癌H22的抗血管生成作用,并對其機制進行初步探討。
　　 方法：
　　 1、肝癌H22小鼠模型的建立：將冷凍保存在-80℃冰箱中的H22肝癌細胞復蘇后,注射入昆明小鼠左腋下,7日后,腫瘤生成明顯。在無菌條件下取腫瘤,以培養(yǎng)液調整其中瘤細胞密度至1×10*7個細胞/ml,用注射器吸取腫瘤懸液0.2ml注入32只4-5周齡的雄性昆明小鼠右腋下的皮

2、下進行接種,建立動物模型。將32只小鼠隨機分為A、B、C、D四組,每組8只。
　　 2、給藥：在實驗第一天A組開始給藥,在實驗第五天B組開始給藥,在實驗第九天C組開始給藥。給藥方法：每天腹腔內注入恩度,3mg/Kg。實驗第五天四組小鼠同時接種腫瘤。D組只接種腫瘤不給藥。實驗第十八天宰殺小鼠,留取腫瘤組織備用。
　　 3、標本制備：眼眶取血后處死小鼠,解剖出腫瘤稱重。將全部標本均經(jīng)10％中性福爾馬林固定,石蠟包埋組織,制成

3、5μm厚切片,切片經(jīng)二甲苯脫蠟,梯度酒精至水化;1％甲醇雙氧水浸泡;0.125％胰酶消化,非免疫性動物血清封閉,抗CD31單克隆抗體標本,室溫下孵育60分鐘;生物素化二抗,37℃10分鐘。鏈親和素-過氧化物酶溶液室溫孵育10分鐘,DAB鏡下控制顯色,蘇木素復染,中性樹膠封片。
　　 4、觀察指標：實驗第九天天始,每天測量所有小鼠腫瘤大小,計算腫瘤體積。腫瘤體積=長徑*橫徑2/2。計算腫瘤標本微血管密度。
　　 5、統(tǒng)計分

4、析：分析實驗第十八天不同給藥組與對照組相比小鼠腫瘤體積和微血管密度是否有統(tǒng)計學差異。采用SPSS17.0專用統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。使用單因素方差分析對實驗數(shù)據(jù)結果進行方差齊性檢驗和統(tǒng)計分析,進一步采用LSD-t檢驗對數(shù)據(jù)進行多組間的兩兩比較分析與推斷。
　　 結果：
　　 實驗第十八天：接種腫瘤當天開始腹腔給藥組(B組)與對照組(D組)相比腫瘤體積和微血管密度有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。接種腫瘤前開始給藥組(A組)

5、和接種腫瘤后開始給藥組(C組)與對照組(D組)相比腫瘤體積和微血管密度沒有統(tǒng)計學差異。
　　 結論：
　　 單獨應用恩度(重組人血管內皮抑制素)有抗腫瘤作用,接種腫瘤時用藥為最佳給藥時機。
　　 血管形成是腫瘤生長和轉移的基礎,腫瘤血管的形成方式多樣、分子機制復雜,涉及多因子參與的多步驟過程,明確腫瘤血管形成的各個環(huán)節(jié),恢復促血管生成因子和抗血管生成因子之間的平衡可以使血管結構“正?；?隨著我們對這些機制的認識

6、加深,抗腫瘤血管治療的方法將越來越合理,本文就惡性腫瘤血管形成的機制及抗血管生成的藥物治療情況進行了簡要綜述。血管生成的方式主要包括以下幾個方面：出芽式血管生成,套疊式血管生成,血管內皮干細胞的募集,血管選定,鑲嵌體血管,血管生成擬態(tài)等。分子水平上,血管生成受兩大類因子調控,分別為促血管生成因子和血管生成抑制因子。目前抗腫瘤血管形成主要有以下途徑：①抑制血管外基質降解;②抑制促血管生成因子;③抑制內皮細胞的增殖和(或)誘導其凋亡;④提高