多藥耐藥肝癌細胞通過激活TGF-β1-Smad3信號富集CD133+亞群細胞.pdf

1、目的:腫瘤干細胞是腫瘤化療失敗的根源。在乳腺癌、肺癌及結(jié)直腸癌中，研究表明化療可以富集腫瘤干細胞。然而化療富集腫瘤干細胞的機制并不明確。CD133分子作為分離腫瘤干細胞的常用標(biāo)記，已在大量實體瘤中被證明。CD133+肝癌細胞已被證實具有肝癌干細胞的生物學(xué)特性。化療能否富集肝癌干細胞，目前研究報道較少。我們主要探討化療能否富集肝癌干細胞(CD133+肝癌亞群細胞)并初步分析其調(diào)節(jié)肝癌干細胞的分子機制。
　　 方法:采用紫杉醇(Pa

2、clitaxel，PTX)藥物大劑量沖擊間歇誘導(dǎo)法建立穩(wěn)定的多藥耐藥細胞(Huh7.5.1/PTX)。CCK-8試驗檢測耐藥細胞及其親本細胞的藥物敏感性。Western Blot(WB)和流式細胞術(shù)(FCM)檢測親本細胞、耐藥細胞及TGFβ1、TGF-β1中和抗體、Smad3特異性抑制劑(SIS3)作用后的Smad3活性及CD133的表達變化。
　　 結(jié)果:歷時6個月建成Huh7.5.1/PTX細胞株，其對PTX高度耐藥，耐藥指

3、數(shù)為15.70，且對順鉑、5-氟尿嘧啶、阿霉素、絲裂霉素及吉西他濱等化療藥物有不同程度的交叉耐藥性。FCM結(jié)果顯示Huh7.5.1/PTX細胞相比親本細胞具有更高的CD133+細胞比列(69.9％vs19.4%，p＜0.01)：TGF-β1作用Huh7.5.1后CD133+細胞比例增加(35.3%vs18.6%，p＜0.01)，加入SIS3作用后CD133細胞比例減少(15.5%vs35.3%，p＜0.01)：SIS3作用Huh7.5.

4、1和Huh7.5.1/PTX細胞后CD133+細胞出現(xiàn)明顯的減少(11.9%vs18.6%，p＜0.05；29.9%vs69.3%，p＜0.01);TGF-β1中和抗體作用Huh7.5.1/PTX細胞后CD133＇細胞比例減少(39.5%vs53.6%，p＜0.01)。WB結(jié)果證實了FCM的結(jié)果，顯示Huh7.5.1/PTX細胞相比原代細胞高表達CD133、TGF-β1及磷酸化的Smad3表達增加；TGF-β1作用Huh7.5.1后CD