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1、廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下,獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果,均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明,并符合法律規(guī)范和《廈門大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活搠纛羔‰?,帨Y塋燃帑秈,硎,眥/7銘茄坼嬸堆務(wù)∞默另外,該學(xué)位論文為(憾辛加I廊桀≯方揚(yáng)菇軌擬l智聲課題(組)的研究成果,獲得(爰1司珥)課題(組)經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助,在(帆蠶亍易腫脆訃礴實(shí)驗(yàn)室完成。(請(qǐng)?jiān)谝陨侠ㄌ?hào)內(nèi)填寫課題或課題組負(fù)責(zé)
2、人或?qū)嶒?yàn)室名稱,未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的,可以不作特聲明人(簽名):菇扛素歷、砌l∑年多只’日摘要摘要化療是晚期肝癌患者輔助治療的重要方法之一,但其效果不理想,腫瘤耐藥性的產(chǎn)生是重要原因之一。目前研究發(fā)現(xiàn)腫瘤干細(xì)胞與化療耐藥性產(chǎn)生密切相關(guān)。因此,研究肝癌化療耐藥與肝癌干細(xì)胞之間的相關(guān)性并闡明其耐藥機(jī)制,可以為晚期肝癌的治療尋找新的有效治療靶點(diǎn)。本研究通過運(yùn)用化療藥物阿霉素(ADM)梯度溶度作用Huh751肝癌細(xì)胞,誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞株Huh751/
3、ADM的形成,通過檢測(cè)比較Hull751/ADM與Huh751細(xì)胞之間表面標(biāo)記物CDl33的表達(dá)差異及信號(hào)傳導(dǎo)蛋白Smad3的表達(dá)變化,并測(cè)試運(yùn)用Smad3特異性抑制劑SIS3作用后耐藥細(xì)胞株CDl33表達(dá)的逆轉(zhuǎn)情況,初步探索化療是否可以誘導(dǎo)富集肝癌干細(xì)胞及其作用機(jī)制和尋找相關(guān)靶點(diǎn)。采用化療藥物梯度濃度誘導(dǎo)法作用于Huh751肝癌細(xì)胞,經(jīng)歷12個(gè)月構(gòu)建相對(duì)穩(wěn)定表達(dá)CDl33表面標(biāo)記物的耐藥細(xì)胞株Huh751/ADM。通過CcK8實(shí)驗(yàn)分析
4、比較Huh751和Huh751/ADM之間的對(duì)不同化療藥物的敏感性,qI盯一PCR比較兩者之間相關(guān)干性基因的表達(dá)差異,流式細(xì)胞儀分析比較兩者之間細(xì)胞凋亡以及肝癌干細(xì)胞表面標(biāo)記物CDl33分子的表達(dá)差異。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察Huh751和Huh751/ADM的增殖狀況。WestemBlotting檢測(cè)Smad3、pSmad3及各凋亡蛋白的表達(dá)情況以及使用Smad3特異性抑制劑sis3作用于Huh751/ADM穩(wěn)定的細(xì)胞株之后信號(hào)通路上各相
5、關(guān)蛋白的表達(dá)變化,并檢測(cè)其對(duì)化療藥物的敏感性,分析運(yùn)用SIS3后細(xì)胞干性變化。實(shí)驗(yàn)證明,運(yùn)用ADM梯度濃度誘導(dǎo)Huh751細(xì)胞后建立了相對(duì)穩(wěn)定的耐藥細(xì)胞株Hull751/ADM,成功富集了CDl33標(biāo)記的干細(xì)胞,且pSmad3蛋白表達(dá)增強(qiáng),運(yùn)用SIS3后,成功逆轉(zhuǎn)了CDl33的表達(dá)比例及干性的表達(dá)能力。綜上,ADM化療耐藥成功誘導(dǎo)富集了CDl33肝癌干細(xì)胞,且通過激活信號(hào)傳導(dǎo)蛋白Smad3作用,SIS3靶向此位點(diǎn)具有逆轉(zhuǎn)肝癌干細(xì)胞的作用
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