2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構(gòu)建miR—133a的真核表達(dá)載體,研究miR—133a在阿霉素誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞凋亡中的作用,為心血管疾病的靶向治療研究提供理論依據(jù)。
   方法:(1)設(shè)計(jì)并合成DNA模板引物,用T4 DNA連接酶將pre—mir—133a連接到線性化的Pgenesil—1.1質(zhì)粒中,對重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切及測序鑒定。(2)以Lipofectamine TM2000 Reagent將鑒定正確的重組質(zhì)粒、空質(zhì)粒、mo—mir—133a in

2、hibitor以及MicroRNA inhibitor N.C瞬時轉(zhuǎn)染H9C2細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀及倒置熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染效率。(3)轉(zhuǎn)染后72h加入阿霉素?fù)p傷細(xì)胞,加藥后分為4組:空質(zhì)粒對照組,重組質(zhì)粒組,Inhibitor組,Inhibitor N.C組。(4)qRT—PCR檢測各組細(xì)胞Caspase—9及PDCD4在mRNA水平的變化。(5)Western blot檢測各組細(xì)胞Caspase—9及PDCD4蛋白水平的表達(dá)。
 

3、  結(jié)果:(1)成功構(gòu)建了miR—133a真核表達(dá)載體。(2)用重組質(zhì)粒Pgenesil—1.1—pre—mir—133a瞬時轉(zhuǎn)染H9C2細(xì)胞,轉(zhuǎn)染效率可達(dá)70%以上。(3)qRT—PCR結(jié)果示轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒及Inhibitor后,與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對照組相比,細(xì)胞中Caspase.9及PDCD4基因的mRNA表達(dá)水平均沒有明顯變化(P>0.05)。(4)Western blot結(jié)果示轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組細(xì)胞中,Caspase—9及PDCD4蛋白有

4、低表達(dá);轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后,上調(diào)miR—133a的表達(dá),Caspase—9及PDCD4蛋白的表達(dá)水平降低(0.409±0.009 vs0.245±0.007,P<0.05;0.395±0.008 vs0.236±0.019,P<0.05);轉(zhuǎn)染Inhibitor抑制了miR—133a的表達(dá),Caspase—9及PDCD4蛋白表達(dá)水平顯著升高(0.409±0.009 vs0.675±0.018,P<0.05;0.395±0.008 vs0.6

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