艾塞那肽對(duì)H2O2誘導(dǎo)H9c2心肌凋亡調(diào)控及機(jī)制研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　實(shí)驗(yàn)一、艾塞那肽對(duì)H9c2心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用
　　方法：H2O2誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。激光共聚焦檢測(cè)正常H9c2細(xì)胞GLP-1受體（GLP-1R）表達(dá)；MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力，酶法檢測(cè)培養(yǎng)液上清乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）、超氧化物歧化酶（superoxide Dismutase，SOD）活性，丙二醛（maleicdialdehyde，MDA）

2、和肌酸激酶同工酶（creatine kinase-MB，CK-MB）的含量。實(shí)驗(yàn)分組：氧化應(yīng)激損傷組（H2O2組）、不同濃度EX預(yù)處理組（0.01，0.1，1，10nmol·L-1）、正常對(duì)照組（NC組）。
　　結(jié)果：正常H9c2心肌細(xì)胞膜上有GLP-1R表達(dá)。H2O2組與正常對(duì)照組相比，H9c2細(xì)胞活力下降近50％，SOD活性顯著降低（6.68±0.25vs13.69±0.17），LDH（196.48±2.84vs104.62±

3、4.45），MDA（293.06±37.79vs114.42±10.26），CK-MB（13.88±1.79vs1.34±0.34）活力明顯升高（P<0.05）。EX組與H2O2組相比，當(dāng)EX濃度＞0.1nmol·L-1時(shí)，細(xì)胞活力明顯升高，LDH、CK-MB、MDA活性降低，SOD活性升高，差異有顯著性（P<0.05）。
　　結(jié)論：EX預(yù)處理能減輕H9c2心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，作用呈濃度依賴性。
　　實(shí)驗(yàn)二、艾塞那肽對(duì)H2

4、O2誘導(dǎo)H9c2心肌凋亡調(diào)控及與PI3K/AKT信號(hào)通路關(guān)系
　　目的：探討EX對(duì)H9c2心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷后細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用，及其與AKT磷酸化表達(dá)的關(guān)系。
　　方法：建立H2O2誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，蛋白質(zhì)印記（Western-blot）檢測(cè)p-AKT（ser473）及caspase-3蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)分組：氧化應(yīng)激損傷組（H2O2組）、艾塞那肽預(yù)處理組（EX組）、艾塞那肽與

5、PI3K抑制劑預(yù)處理組（EX+LY294002組）、正常對(duì)照組（NC）組。
　　結(jié)果：
　?。?）流式結(jié)果：H2O2組與NC組相比， H9c2細(xì)胞凋亡率增加（45.45±12.30vs11.43±5.69）（P<0.05）；艾塞那肽組與H2O2組相比，細(xì)胞凋亡率減少（25.64±2.22vs45.45±12.30）（P<0.05）；經(jīng)PI3K抑制劑預(yù)處理后，H9c2心肌細(xì)胞凋亡率較艾塞那肽組增加（32.84±5.17vs25

6、.64±2.22）（P>0.05）。
　　（2）western-blot結(jié)果：H2O2組與NC組比較， H9c2心肌細(xì)胞p-AKT（ser473）蛋白表達(dá)水平降低（0.35±0.021vs0.39±0.018），caspase-3表達(dá)增加（0.66±0.033vs0.39±0.027）（P<0.05）；EX組與H2O2組相比，p-AKT（ser473）蛋白表達(dá)水平增高（0.89±0.025vs0.35±0.021），caspase