Fractalkine誘導H9C2心肌細胞凋亡及黃芪甲苷的干預作用.pdf

1、目的:探討可溶性Fractalkine對于H9C2心肌細胞的增殖的影響;進一步探討可溶性Fractalkine對H9C2心肌細胞凋亡的影響及黃芪甲苷的干預作用。
　　方法:首先分別選用0ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml、500ng/ml的可溶性Fractalkine刺激H9C2心肌細胞，分別于0、12、24、36、48小時采用MTT法檢測可溶性Fractalkine對心肌細胞增殖的

2、作用;計算出可溶性Fractalkine作用的最佳時間及最佳作用劑量;然后分別采用0ng/ml（A組）、200ng/ml（B組）、200ng/ml可溶性Fractalkine+50mg/L黃芪甲苷（C組）刺激H9C2心肌細胞，通過熒光染色檢測細胞的凋亡情況;并進一步應用流式細胞儀測定細胞凋亡百分數(shù)，通過蛋白免疫印跡(western blotting)及實時定量聚合酶鏈式反應(RT-qPCR)測定可溶性Fractalkine對H9C2心肌

3、細胞凋亡的影響。計量資料采用均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，采用非配對t檢驗或單因素方差分析，按P＜0.05的檢驗水準，具有統(tǒng)計學意義。
　　結果:1.低劑量的可溶性的Fractalkine就能夠抑制H9C2心肌細胞的增殖;而且此抑制作用隨著可溶性Fractalkine濃度的增加及作用時間的延長而增加，各組間有統(tǒng)計學差異;得出最佳作用時間為24小時，半數(shù)抑制劑量為277.5ng/ml;2.通過熒光染色發(fā)現(xiàn)可溶性Fractalkin

4、e可誘導心肌細胞凋亡;應用黃芪甲苷后可見凋亡細胞減少;3.Annexin-FITC檢測細胞凋亡率，顯示A組、B組、C組凋亡率分別為4.13±0.07％，41.64±0.75％，34.07±0.55％;提示可溶性Fractalkine可誘導H9C2心肌細胞凋亡(P＜0.001)，而黃芪甲苷可以抑制這種作用(P＜0.01);4.Western blotting結果顯示，B組Bcl-2的表達減少，Bax的表達增加(P＜0.05)，應用黃芪甲苷

5、后可抑制這種作用（P＜0.05）;5.RT-qPCR結果顯示:B組Bcl-2 mRNA的表達量明顯減少，而Bax mRNA的表達量明顯增加(P＜0.001)，應用黃芪甲苷后可抑制這種作用（P＜0.01）。
　　結論:1.可溶性Fractalkine可抑制H9C2心肌細胞增殖，此作用隨著可溶性Fractalkine濃度的增加及作用時間的延長而增大;2.可溶性Fractalkine可誘導H9C2心肌細胞發(fā)生凋亡;3.黃芪甲苷可減少可溶