Nm23-H1基因轉(zhuǎn)染前后“肺癌轉(zhuǎn)移抑制級聯(lián)”相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平變化的研究.pdf

1、肺癌是全世界發(fā)病率和死亡率增長最快，對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤。為了探討nm23-H1對“肺癌轉(zhuǎn)移抑制級聯(lián)”相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)調(diào)控的影響及其分子機(jī)理，本研究應(yīng)用構(gòu)建了帶有增強(qiáng)綠色熒光蛋白和野生型nm23-H1 基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒真核表達(dá)載體PLXSN-nm23-H1-EGFP，成功轉(zhuǎn)染到人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株L9981中，成功構(gòu)建轉(zhuǎn)基因人肺癌細(xì)胞株L9981-nm23-H1,并應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對人肺癌細(xì)胞株L9981轉(zhuǎn)染nm2

2、3-H1基因后5個“肺癌轉(zhuǎn)移抑制級聯(lián)”相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行驗(yàn)證。 本研究觀察到：1．人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞株L9981具有nm23-H1基因的雜合性缺失。 2．應(yīng)用質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化，酶切，連接技術(shù)成功構(gòu)建了逆轉(zhuǎn)錄病毒真核表達(dá)載體pLXSN-nm23-H1-EGFP，將質(zhì)粒pLxSN-nm23-H1-EGFP轉(zhuǎn)染L9981細(xì)胞株后，nm23-H1-EGFP融合蛋白能夠在L9981細(xì)胞株內(nèi)持續(xù)、穩(wěn)定和高效表達(dá)。 3．nm

3、23-H1基因轉(zhuǎn)染可使L9981細(xì)胞株中低氧誘導(dǎo)因子-1α (HIF-1α)mRNA表達(dá)顯著下調(diào)(p=0.000)。 4．nm23-H1基因轉(zhuǎn)染可提高L9981肺癌細(xì)胞株基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物-2(TIMP-2)轉(zhuǎn)錄表達(dá)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。nm23-H1基因轉(zhuǎn)染可提高內(nèi)皮抑素(endostatin)的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平，但差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.055)。 5．nm23-H1 基因轉(zhuǎn)染可顯著上調(diào)人肺癌細(xì)胞株L9981 膜

4、蛋白Semaphorin-3F基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)(p<0.005)。 6．nm23-H1 基因轉(zhuǎn)染人肺癌細(xì)胞株L998l后，窖蛋白-1基因( CAV-1)的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平無顯著變化(P>0.05)。 結(jié)論：(1)人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞株L9981中存在nm23-H1等位基因的雜合性缺失。(2)nm23-H1基因可明顯下調(diào)L9981肺癌細(xì)胞株中Hif-1α基因mRNA表達(dá)水平。(3)nm23-H1基因轉(zhuǎn)染可以顯著上調(diào)轉(zhuǎn)Semaphor