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1、目的:研究在原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中乙型肝炎病毒(HBV)DNA多聚酶/逆轉(zhuǎn)錄酶P基因的表達(dá)與X、P基因整合的關(guān)系,闡明HBV的整合機(jī)制以及肝細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制.方法:選擇HBsAg陽(yáng)性的原發(fā)性肝癌病人40例,其中Ⅰ期患者4例,Ⅱ期14例,Ⅲ期22例;血清HBVDNA陽(yáng)性7例,HBVDNA陰性33例;另選擇5例HBsAg陰性的原發(fā)性肝癌患者和5例HBsAg陰性的健康體檢者作陰性對(duì)照和健康對(duì)照.提取全血中
2、PBMCs,分別進(jìn)行PBMCs中細(xì)胞基因組總DNA和總RNA提取,其中總RNA提取后經(jīng)無RNA酶的DNA酶I消化去除殘存的基因組DNA后逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA.設(shè)計(jì)并合成HBV的P基因及X基因引物P1 P2及X1 X2,以逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA為模板,用編碼DNA多聚酶/逆轉(zhuǎn)錄酶的P基因引物行RT-PCR擴(kuò)增,以檢測(cè)HBV逆轉(zhuǎn)錄酶P基因在PBMCs中的表達(dá)情況;以提取的總DNA為模板,分刖用P基因及X基因引物行PCR擴(kuò)增,以檢測(cè)P、X基因在P
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