雙苯氟嗪代謝物對(duì)離體大鼠基底動(dòng)脈的舒血管活性及機(jī)制研究.pdf

1、自人類研究藥物治療疾病開始,藥物代謝則被認(rèn)為是影響藥物作用的最重要因素之一。其中,研究藥物的代謝物是藥物代謝研究中不可缺少的一部分。
　　 藥物進(jìn)入機(jī)體后即與機(jī)體間發(fā)生一系列的相互作用,使其結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化。在這個(gè)過(guò)程中,一些藥物經(jīng)代謝失去了藥理活性,隨尿和糞便最終排出體外;但也有一些藥物則通過(guò)代謝產(chǎn)生了有藥理活性或者毒性的代謝物。這些代謝物可能與藥物的治療作用密切相關(guān),在某些情況下,代謝物有活性甚至其活性超過(guò)其母體藥物,在藥物治

2、療中發(fā)揮著重要的作用;而有些代謝物在代謝中可能會(huì)有較長(zhǎng)的半衰期或表現(xiàn)為非線性動(dòng)力學(xué)消除,這時(shí)必須考慮代謝物的可能蓄積作用,以及由此帶來(lái)的藥物的蓄積中毒反應(yīng);代謝物有時(shí)具有治療作用之外的活性,或者具有毒副作用,甚至具有潛在的致癌、致畸和致突變作用,影響藥物治療的安全性。
　　 因此,研究藥物代謝物的活性對(duì)更好地設(shè)計(jì)新藥,保證臨床用藥的安全性及有效性有著十分重要的意義。
　　 雙苯氟嗪(dipfluzine,Dip)是河北醫(yī)

3、科大學(xué)藥學(xué)院按第Ⅳ類鈣拮抗劑桂利嗪(腦益嗪,cinnarizhine,Cin)和中樞多巴胺受體阻斷劑氟哌啶的化學(xué)結(jié)構(gòu),首創(chuàng)設(shè)計(jì)合成的一個(gè)新型的桂利嗪類衍生物。它對(duì)腦血管有高度選擇性擴(kuò)張作用,能抑制血小板聚集及血栓形成,可有效防止腦缺血所致的腦水腫,縮小腦梗死范圍,改善腦缺血所致的體感誘發(fā)電位紊亂和腦血流減少,降低腦缺血所致的興奮性氨基酸濃度升高,且上述作用均顯著強(qiáng)于桂利嗪,顯示出其作為腦血管疾病治療藥物的潛在價(jià)值。
　　 本實(shí)驗(yàn)

4、室已研究了雙苯氟嗪在大鼠體內(nèi)的代謝途徑及其代謝物,表明在大鼠體內(nèi)雙苯氟嗪主要經(jīng)哌嗪環(huán)1-和4-氮脫烷基代謝,一些代謝物再與葡萄糖醛酸和/或硫酸結(jié)合。根據(jù)大鼠尿液中雙苯氟嗪及其代謝物紫外吸收峰的高低,推算雙苯氟嗪在大鼠體內(nèi)主要以1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮、4-羥基-二苯甲酮、4-氟-γ-羥基苯丁酸、二苯甲醇和二苯甲酮等代謝產(chǎn)物形式從尿中排出體外。目前,尚無(wú)對(duì)雙苯氟嗪代謝物舒血管活性的研究。
　　 本實(shí)驗(yàn)旨在研究雙苯氟嗪及其

5、代謝物對(duì)高鉀/5-HT預(yù)收縮血管的影響,探討是否存在活性代謝物,并研究其舒血管機(jī)制。
　　 第一部分雙苯氟嗪代謝物舒血管的活性研究
　　 目的:通過(guò)對(duì)比雙苯氟嗪及其代謝物對(duì)高鉀/5-HT預(yù)收縮血管的抑制作用,找出具有舒血管活性的代謝物。
　　 方法:急性分離250 g左右雄性大鼠基底動(dòng)脈,選擇無(wú)分支段0.5 mm連同其前后各2 mm血管,穿套于Pressure Myogragh System Model120CP

6、浴槽中兩根極細(xì)玻璃電極上,并結(jié)扎固定,管腔給予70 mmHg壓力,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中持續(xù)向浴槽內(nèi)通入95％O2+5％CO2混合氣,溫度保持37℃。穩(wěn)定一小時(shí)后分別采用表面灌流給藥,觀察不同濃度的雙苯氟嗪及其代謝物對(duì)高鉀/5-HT預(yù)收縮血管的抑制作用。
　　 結(jié)果:
　　 1血管的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在無(wú)外界刺激時(shí),本研究所用大鼠基底動(dòng)脈血管直徑在持續(xù)灌流5 min、10 min、15 min、30 min和6

7、0 min后,血管的收縮幅度分別為100.47％±1.12％、99.67％±1.21％、100％±1.86％、100.83％±3.05％、101.14％±2.99％,與穩(wěn)定前的血管直徑100％±0.00％相比無(wú)明顯改變(P＞0.05),且間隔1 h先后兩次給予高K+-PSS液后,血管直徑的收縮幅度分別為:63.84％±1.94％和64.38％±3.64％,對(duì)于血管初期的血管直徑100％±0.00％有顯著收縮(P＜0.05),但二者之間無(wú)

8、顯著性差別(P＞0.05),提示在本實(shí)驗(yàn)條件下,該基底動(dòng)脈的反應(yīng)活性至少可以穩(wěn)定60 min。
　　 2雙苯氟嗪舒血管活性的測(cè)定
　　 2.1雙苯氟嗪對(duì)高鉀所致血管收縮的抑制作用
　　 以未灌流雙苯氟嗪時(shí)50 mol/L KCl收縮血管的幅度為100％,不同濃度(10-10～10-3 mol/L)雙苯氟嗪對(duì)50 mol/L KCl收縮血管作用的抑制百分率分別為:0.0180±0.0069、0.0364±0.018

9、7、0.0545±0.0329、0.0651±0.0323、0.2011±0.0287、0.4802±0.0491、0.5315±0.0513、0.5363±0.0597,其IC50=1.8277E-6±2.2228E-7。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,雙苯氟嗪對(duì)高鉀預(yù)刺激血管有著明顯的抑制作用,且呈明顯的濃度依賴性。提示雙苯氟嗪可能是通過(guò)阻滯電壓依賴型鈣離子通道而發(fā)揮舒血管活性。
　　 2.2雙苯氟嗪對(duì)5-HT所致血管收縮的抑制作用
　

10、　 以未灌流雙苯氟嗪時(shí)5×10-7mol/L5-HT收縮血管的幅度為100％,計(jì)算不同濃度(10-10～10-3 mol/L)雙苯氟嗪對(duì)5×10-7 mol/L5-HT收縮血管作用的抑制百分率分別為:0.0203±0.0092、0.0404±0.0268、0.1410±0.0538、0.2184±0.0521、0.5069±0.0499、0.7903±0.0518、0.9455±0.0583、0.9412±0.0614,其IC50=9

11、.5916E-7±2.3346E-7。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,雙苯氟嗪對(duì)5-HT預(yù)刺激血管也有著明顯的抑制作用,且呈明顯的濃度依賴性。提示雙苯氟嗪也能是通過(guò)阻滯受體操控型鈣離子通道而發(fā)揮舒血管活性。
　　 3雙苯氟嗪代謝物舒血管活性測(cè)定
　　 3.11-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮對(duì)高鉀所致血管收縮的抑制作用
　　 以未灌流1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮時(shí)50 mol/L KCl收縮血管的幅度為100％,不同濃度(1

12、0-8～10-4 mol/L)1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮對(duì)50mol/L KCl收縮血管作用的抑制百分率分別:0.0432±0.0114、0.0748±0.0160、0.2756±0.0270、0.4504±0.0115、0.5285±0.0136,其IC50=1.1454E-6±3.093E-7。結(jié)果顯示,1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮對(duì)高鉀預(yù)刺激血管有著明顯的抑制作用,且呈明顯的濃度依賴性。提示1-(4-氟苯基)-4-哌

13、嗪基丁酮可能是通過(guò)阻滯電壓依賴型鈣離子通道而發(fā)揮舒血管活性。
　　 3.21-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮對(duì)5-HT所致血管收縮的抑制作用
　　 以未灌流1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮時(shí)5×10-7 mol/L5-HT收縮血管的幅度為100％,計(jì)算不同濃度(10-8～10-4 mol/L)1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮對(duì)5×10-7 mol/L5-HT收縮血管作用的抑制百分率分別為:0.0301±0.0106、

14、0.1661±0.0232、0.7529±0.0302、0.9667±0.0125、0.9816±0.0099,其IC50=3.9663E-6±1.1595E-9。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮對(duì)5-HT預(yù)刺激血管也有著明顯的抑制作用,且呈明顯的濃度依賴性。提示1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮也能通過(guò)阻滯受體操控型鈣離子通道而發(fā)揮舒血管活性。
　　 結(jié)論:
　　 雙苯氟嗪及其代謝物1-(4-氟苯基)-

15、4-哌嗪基丁酮對(duì)高鉀/5-HT所致血管收縮有明顯的抑制作用,且呈明顯的濃度依賴性。而代謝物4-羥基-二苯甲酮、4-氟-γ-羥基苯丁酸、二苯甲醇和二苯甲酮對(duì)高鉀/5-HT所致血管收縮沒(méi)有明顯的抑制作用。以上結(jié)果說(shuō)明雙苯氟嗪代謝物中只有1-(4-氟苯基)-4-哌嗪基丁酮具有舒血管活性,且舒張血管的機(jī)制可能與抑制電壓依賴型和受體操縱型鈣離子通道有關(guān)。
　　 第二部分雙苯氟嗪代謝物舒血管機(jī)制的研究
　　 目的:通過(guò)比較雙苯氟嗪以

16、及活性代謝物對(duì)高鉀/5-HT預(yù)收縮內(nèi)皮完整/去內(nèi)皮血管的抑制作用,探討雙苯氟嗪以及活性代謝物的舒血管機(jī)制。
　　 方法:在內(nèi)皮完整/去內(nèi)皮血管中測(cè)定雙苯氟嗪以及活性代謝物對(duì)高鉀/5-HT預(yù)收縮的抑制作用。在內(nèi)皮完整血管測(cè)定內(nèi)皮舒張因子抑制劑對(duì)雙苯氟嗪以及活性代謝物抑制作用的影響。在內(nèi)皮完整血管測(cè)定鉀離子通道抑制劑對(duì)雙苯氟嗪以及活性代謝物抑制作用的影響。
　　
　　 結(jié)論:雙苯氟嗪及其代謝物1-(4-氟苯基)-4