雙苯氟嗪腦保護(hù)作用的分子機(jī)制.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文雙苯氟嗪腦保護(hù)作用的分子機(jī)制姓名：張英俊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：王永利20040401中文摘要我們知道，轉(zhuǎn)錄因子N F ．K B 受外界刺激因素活化后，作用于靶基因，可迅速誘導(dǎo)基因表達(dá)。實(shí)驗(yàn)證到‘3 j ，N F ．v ．B 通過(guò)對(duì)基因( 如i N O S ，T N F ．a(chǎn)等) 表達(dá)的調(diào)控從而調(diào)節(jié)免疫及炎癥反應(yīng)，而i N O S ，T N F —d 等的表達(dá)反過(guò)來(lái)刺激N F ．r ．B 的進(jìn)一步

2、活化，從而形成正反饋效應(yīng)，造成組織損傷。實(shí)驗(yàn)表明，N F - r , B 的激活具有兩面性，即N F ．K B 短暫的激活具有神經(jīng)保護(hù)作用，而持續(xù)的激活則可能損傷組裂1 4 ，”】。S h e n 等【l 6 】的實(shí)驗(yàn)證實(shí)N F ．v ．B參與了腦缺血再灌注損傷，具有神經(jīng)保護(hù)作用。新近，我們也在大鼠腦缺血再灌注損傷模型發(fā)現(xiàn)D I P 能夠抑制C D 9 5 分子的表達(dá)。根據(jù)以上的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們提出，同T 淋巴細(xì)胞凋亡機(jī)制的產(chǎn)生一樣，轉(zhuǎn)錄

3、因子N F ．r ．B或／和C a Z + ／C a M K ．C a l c i n e u r i n - N F A T - C D 9 5 分子通路可能參與了腦缺血再灌注損傷。D I P 通過(guò)抑制L ．型鈣通道的鈣電流，調(diào)節(jié)N F ．1 ①的D N A 結(jié)合活性；抑制C a l c i n e u r i n 的活性和／或表達(dá)，或增強(qiáng)G S K ．3 的活性和／或表達(dá)；調(diào)節(jié)N F A T 的D N A 結(jié)合活性，從而抑制C D

4、9 5 分子誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，發(fā)揮抗腦缺血再灌注損傷作用。為驗(yàn)證我們上述的假說(shuō)，本研究將采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)，激光共聚焦顯微鏡及分子生物學(xué)技術(shù)等，利用大鼠腦缺血再灌注損傷模型評(píng)價(jià)：( 1 ) D I P 在在體腦缺血再灌注損傷中的作用；( 2 ) D I P 與死亡信號(hào)轉(zhuǎn)道通路之間的關(guān)系；( 3 ) 轉(zhuǎn)錄因子N F A T c 及N F ．，出在腦缺血再灌注損傷中的作用；( 4 ) C a l c i n e u r i

5、n ，G S K ．3 在腦缺血再灌注損傷中的作用，并探討D I P 的基因轉(zhuǎn)錄抑制功能。這些將對(duì)闡明D I P 抗腦缺血一再灌注損傷的分子機(jī)制提供重要的理論依據(jù)。1 ．D I P 在在體( i n v i v o ) 腦缺血再灌注損傷中的作用l O ～1 2 周齡，體重2 5 0 ～3 0 0 克S D 雌性大鼠，四血管阻斷法制備全腦缺血再灌注損傷模型( 缺血1 5r a i n ，再灌注三天) ，雙苯氟嗪( 2 0 m g &

6、; g ，4 0m g & g 和8 0 m g ／k g ) 灌胃給藥，每日一次。研究結(jié)果顯示：( 1 ) 共聚焦顯微鏡掃描技術(shù)( C o n f o c a l ) 觀察A O ／E B 雙瑩光染色海馬神經(jīng)元：假手術(shù)組以正常海馬神經(jīng)元( 核發(fā)黃綠色．黃色熒光，密度不均，呈結(jié)構(gòu)樣特征) 居多，有少量早期凋亡的海馬神經(jīng)元( 核熒光亢進(jìn)，呈均勻一致的綠色) ；溶劑組多見(jiàn)晚期凋亡的海馬神經(jīng)元( 核呈橙紅色，可見(jiàn)核的斷裂和濃縮) ；與