顯性脊柱裂胎鼠脊髓神經(jīng)組織細(xì)胞凋亡與MAPK家族JNK關(guān)系的研究.pdf

1、目的：神經(jīng)管畸形(NTD)是人類常見先天畸形，是影響人口素質(zhì)的最常見、最嚴(yán)重的出生缺陷性疾病之一。本研究以胚胎12、15、17和20天神經(jīng)管畸形大鼠為研究對象，采用HE染色法、免疫組織熒光染色法、Western—blot法觀察胚胎12天、15天、17天和20天神經(jīng)管畸形大鼠神經(jīng)組織細(xì)胞caspase—3表達和分布，并進一步對caspase—3表達和MAPK家族JNK蛋白磷酸化的關(guān)系進行了初步探討。對于深入探討神經(jīng)管畸形的病理演變規(guī)律具有

2、重要意義。 方法：①維甲酸溶于橄欖油中(40mg/ml)，以劑量為135mg/kg給藥，經(jīng)胃管注入孕10天Wister大鼠制作神經(jīng)管畸形大鼠模型，給等量橄欖油為對照組。②應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測caspase—3在對照組、畸形組胎鼠脊髓組織細(xì)胞中的分布和表達。③應(yīng)用Western blot方法檢測畸形組與對照組胎鼠脊髓組織MAPK家族中JNK磷酸化情況。 結(jié)果：⑴在大鼠孕10天給予維甲酸(135mg/kg體重)，孕12天

3、、15天、17天、20天剖腹取出胎鼠可發(fā)現(xiàn)腦膨出、脊柱裂、無尾、肛門閉鎖等多種畸形。⑵用免疫熒光染色方法可發(fā)現(xiàn)胚胎15天、17天和20天顯性脊柱裂畸形鼠脊髓組織caspase—3陽性細(xì)胞數(shù)多于對照組，熒光強度高于對照組。胚胎15天、17天、20天顯性脊柱裂畸形鼠脊髓組織caspase—3陽性細(xì)胞數(shù)明顯多于胚胎12天顯性脊柱裂畸形組。⑶用Western—blot方法檢測不同組胎鼠脊髓神經(jīng)組織中MAPK家族JNK磷酸化水平，結(jié)果表明胚胎12

4、天、15天、17天和20天脊柱裂畸形鼠脊髓神經(jīng)組織JNK磷酸化水平高于對照組。脊柱裂畸形鼠胚胎15天脊髓神經(jīng)組織JNK磷酸化水平達到峰值。 結(jié)論：①胚胎12、15、17、20天顯性脊柱裂胎鼠脊髓組織caspase—3陽性細(xì)胞數(shù)目從胚胎15天開始明顯增多，提示細(xì)胞進入凋亡高峰階段。②顯性脊柱裂胎鼠脊髓神經(jīng)組織細(xì)胞MAPK家族JNK磷酸化在胚胎15天達到峰值，同時顯性脊柱裂胎鼠脊髓組織caspase—3陽性細(xì)胞數(shù)目從胚胎15天開始明