三氯乙烯誘導(dǎo)裸鼠皮膚組織細(xì)胞凋亡作用的研究.pdf

1、1 研究目的 研究細(xì)胞凋亡在三氯乙烯對(duì)BALB/c裸鼠皮膚組織損傷中的作用，并通過檢測細(xì)胞凋亡的相關(guān)指標(biāo)，探討細(xì)胞凋亡的信號(hào)傳導(dǎo)通路，通過研究維生素E和銀杏葉提取物的保護(hù)作用，探討TCE引起皮膚組織細(xì)胞凋亡的發(fā)生機(jī)理，為防治職業(yè)性ICD提供新的思路和科學(xué)的理論依據(jù)。 2 研究方法 從上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司購進(jìn)成年雌性BALB/c裸鼠，隨機(jī)分成空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組(橄欖油)、10％TCE、20％TCE、4

2、0％TCE、80％TCE和100％TCE劑量組以及5％、10％、20％維生素E和0.1％、1％和10％銀杏葉提取物劑量組，將100ul不同濃度的TCE和溶劑對(duì)照涂到2.5cm×2.5cm大小背側(cè)皮膚上，保護(hù)作用研究是先將100ul不同濃度的維生素E和GbE涂到裸鼠背部皮膚上，1h后再將100ul 100％TCE涂到同樣的皮膚位置，敷用時(shí)間為每次4h，試驗(yàn)結(jié)束后用生理鹽水除去殘留受試物，染毒24小時(shí)。 染毒結(jié)束后將裸鼠背部皮膚迅速

3、取下，經(jīng)固定、脫水、包埋、切片后用日本產(chǎn)JEM-1230型透射電鏡觀察攝片。并取部分組織進(jìn)行石蠟包埋，應(yīng)用TUNEL法檢測裸鼠皮膚組織的細(xì)胞凋亡，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測皮膚組織中caspase-3、caspase-8、caspase-9、cytc和AIF的含量，并研究抗氧化劑維生素E和銀杏葉提取物的保護(hù)作用。 3 結(jié)果 (1)電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)在急性刺激試驗(yàn)中100％TCE劑量組的皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞胞漿中的線粒體出現(xiàn)腫

4、脹及空泡變，細(xì)胞核體積縮小，TUNEL 法檢測細(xì)胞凋亡發(fā)現(xiàn)，低劑量組凋亡指數(shù)低，高劑量組凋亡指數(shù)高，各組間caspase-3含量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，低劑量組含量少，高劑量組含量高。 (2)通過免疫組化的方法檢測皮膚組織內(nèi)caspase-9和cytc的含量發(fā)現(xiàn)各組間的差異有顯著性，低劑量組含量較低，10％TCE劑量組與溶劑組之間無差異，其他劑量組的活性較高，cytc的含量在40％TCE劑量組含量最高。 (3)免疫組化檢測皮

5、膚組織內(nèi)caspase-8的含量發(fā)現(xiàn)，各劑量組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，caspase-8活化水平較低。 (4)免疫組化檢測皮膚組織內(nèi)AIF的含量發(fā)現(xiàn)10％TCE劑量組與溶劑組的無差異，高劑量組與溶劑對(duì)照組相比有差異，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (5)經(jīng)不同濃度的VE和GbE處理后的皮膚組織內(nèi)的細(xì)胞凋亡指數(shù)、cytc和AIF以及caspase-9的含量有所下降，且呈現(xiàn)出劑量－效應(yīng)關(guān)系，高劑量組有一定的保護(hù)作用。 4 結(jié)論