三氯乙烯對(duì)BALB-c裸鼠皮膚損傷作用及其機(jī)理研究.pdf

1、研究背景：三氯乙烯(Trichloroethylene，TCE)是一種常見的工業(yè)有機(jī)溶劑，可用做金屬去脂劑、干洗劑、溶劑、萃取劑等，在五金、電子、玩具、印刷等行業(yè)應(yīng)用廣泛。在過去的研究中對(duì)其致機(jī)體的損傷作用主要集中與對(duì)肝臟、腎臟、中樞和末梢神經(jīng)系統(tǒng)、心臟、生殖系統(tǒng)等器官損傷研究。近年來的研究發(fā)現(xiàn)其還可以導(dǎo)致嚴(yán)重的皮膚損傷，許多學(xué)者認(rèn)為TCE造成的皮膚損傷屬于T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的Ⅳ型遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)，然而臨床上僅用T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的Ⅳ型遲發(fā)性變態(tài)

2、反應(yīng)尚不能完全解釋其皮膚損傷機(jī)制。工作場(chǎng)所接觸到外源化合物而導(dǎo)致的皮膚炎性疾患統(tǒng)稱為職業(yè)性接觸性皮炎(Occupationalcontactdermatitis，OCD)，目前根據(jù)發(fā)病機(jī)理不同通常將接觸性皮炎分為刺激性接觸性皮炎(Irritantcontactdermatitis，ICD)和過敏性接觸性皮炎(Allergiccontactdermatitis，ACD)，由于僅用T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的Ⅳ型遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)可能尚不能完全解釋TCE所

3、致皮膚損傷的機(jī)制，表明TCE所致藥疹樣皮膚損傷可能并非只是T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的Ⅳ型遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)，其也可能通過對(duì)皮膚發(fā)生原發(fā)性刺激損傷作用進(jìn)而導(dǎo)致皮膚發(fā)生藥疹樣損傷。 目的：研究TCE對(duì)BALB/c裸鼠的皮膚刺激作用及其作用機(jī)制，通過檢測(cè)皮膚內(nèi)氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)，探討TCE的皮膚刺激作用與氧化應(yīng)激的關(guān)系及其劑量—效應(yīng)關(guān)系，通過研究維生素E和銀杏葉提取物對(duì)TCE致BALB/c裸鼠皮膚刺激損傷的保護(hù)作用，為防治職業(yè)性ICD和指導(dǎo)皮膚防護(hù)用

4、品的開發(fā)提供新的思路和科學(xué)的理論依據(jù)，進(jìn)而指導(dǎo)外源化學(xué)物皮膚危害控制。 方法：將從上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司定購(gòu)進(jìn)體重20-30g/只，成年雌性3BALB/c裸鼠，隨機(jī)分成空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組(橄欖油)、10％TCE、20％TCE、40％TCE、80％TCE、100％TCE和5％SLS陽性對(duì)照組。將50ul不同濃度的TCE、溶劑對(duì)照和陽性對(duì)照涂到2.5cm×2.5cm大小背側(cè)皮膚上，然后用一層塑料膜覆蓋，再用無刺激性膠布及

5、繃帶加以固定。每天染毒兩次，敷用時(shí)間為每次4h，每次試驗(yàn)結(jié)束后都用生理鹽水除去殘留受試物，分別染毒1和14天，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB7919-87《化妝品安全性評(píng)價(jià)程序和方法》中規(guī)定的皮膚刺激試驗(yàn)進(jìn)行視覺評(píng)分。 選取100％TCE劑量組研究5％、10％、20％維生素E和0.1％、1％、10％銀杏葉提取物(M/V)的保護(hù)作用，將50ul不同濃度的維生素E和銀杏葉提取物先涂到2.5cm×2.5cm大小背側(cè)皮膚上處理1h后，然后再將50ul1

6、00％TCE涂到同樣的皮膚位置，每天染毒兩次，敷用時(shí)間為每次4h，試驗(yàn)結(jié)束后用生理鹽水除去殘留受試物后處死動(dòng)物，取背部皮膚進(jìn)行試驗(yàn)。 將裸鼠背部皮膚迅速取下，經(jīng)固定、脫水、包埋、切片后，采用朗珈生物醫(yī)學(xué)工程有限公司研發(fā)的PAS-9000病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行皮膚各層厚度測(cè)量以及病理評(píng)價(jià)，用日本產(chǎn)JEM-1230型透射電鏡觀察攝片。 將裸鼠背部皮膚迅速取下制成勻漿，取上清，采用試劑盒測(cè)定丙二醛(Malondialdehyde

7、，MDA)，超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)含量和活性。用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析 結(jié)果： 1、在急性皮膚刺激試驗(yàn)中，空白組和橄欖油組均未見紅斑或水腫，100％TCE劑量組和5％SLS(陽性對(duì)照組)則出現(xiàn)明顯紅斑或水腫，而TCE作用劑量組的裸鼠皮膚出現(xiàn)紅斑和水腫，且隨劑量的增加其紅斑和水腫的程度也越嚴(yán)重。在累積性皮膚刺激試驗(yàn)中，TCE作用劑量組的裸鼠皮膚出現(xiàn)紅斑和水腫，且隨

8、劑量的增加和染毒時(shí)間延長(zhǎng)其紅斑和水腫的程度也越嚴(yán)重甚至100％TCE劑量組皮膚出現(xiàn)脫屑。 2、經(jīng)不同濃度的VE處理后的皮膚刺激反應(yīng)程度有所下降，且呈現(xiàn)明顯的劑量—效應(yīng)關(guān)系；經(jīng)不同濃度的GbE處理后的皮膚刺激反應(yīng)程度也明顯下降，且呈4現(xiàn)明顯的劑量—效應(yīng)關(guān)系，10％GbE基本能使裸鼠皮膚保持完好的狀態(tài)。 3、通過光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，在急性刺激中TCE所致?lián)p傷部位的皮膚呈現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象和棘層水腫，高劑量組損傷部位皮膚出現(xiàn)棘層

9、松解、以及表皮基底層松解等皮膚急性損傷表現(xiàn)；在累積性刺激中皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞層呈現(xiàn)明顯增厚現(xiàn)象。 4、通過電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，在急性刺激中TCE所致?lián)p傷部位的角質(zhì)形成細(xì)胞胞漿內(nèi)的線粒體出現(xiàn)腫脹及空泡變，隨著染毒劑量增大，腫脹或空泡變的線粒體數(shù)量明顯增加；在累積性刺激中腫脹或空泡變的線粒體數(shù)量有所下降，但出現(xiàn)胞核固縮現(xiàn)象的細(xì)胞數(shù)量有所增加。 5、VE和GbE能有效地抑制TCE所致的皮膚損傷和線粒體改變，且其保護(hù)作用呈現(xiàn)明顯的

10、劑量—效應(yīng)關(guān)系。 6、在急性皮膚刺激試驗(yàn)中，TCE能導(dǎo)致BALB/c裸鼠皮膚內(nèi)的氧化應(yīng)激水平的增加，且抗氧化酶SOD的活性隨著TCE劑量的增加而降低。 7、在累積性皮膚刺激試驗(yàn)中，BALB/c裸鼠皮膚內(nèi)的氧化應(yīng)激水平隨著TCE染毒劑量的增加呈先上升后下降的趨勢(shì)，當(dāng)染毒組TCE體積濃度達(dá)到20％時(shí)皮膚組織中的MDA含量達(dá)到最高，且SOD活性也達(dá)到最高。 8、在急性皮膚刺激試驗(yàn)中，VE和GbE能有效拮抗BALB/c裸

11、鼠皮膚內(nèi)的氧化應(yīng)激水平的增加，且能恢復(fù)抗氧化酶SOD的活性，該拮抗作用呈劑量—效應(yīng)關(guān)系。 9、在累積性皮膚刺激試驗(yàn)中，VE和GbE也能有效拮抗BALB/c裸鼠皮膚內(nèi)MDA含量的增加，但VE和GbE保護(hù)組的抗氧化酶SOD的活性與100％TCE差異不明顯。 結(jié)論： 1、TCE對(duì)BALB/c裸鼠皮膚具有較強(qiáng)的刺激作用，隨著染毒劑量增大和時(shí)間的延長(zhǎng)，皮膚刺激發(fā)應(yīng)也越明顯。 2、TCE所致?lián)p傷部位的角質(zhì)形成細(xì)胞胞漿

12、內(nèi)的線粒體損傷，對(duì)BALB/c裸鼠皮膚的刺激作用中可能發(fā)揮一定作用。 3、VE和GbE可能通過抗氧化作用，有效地降低TCE所致?lián)p傷部位的角質(zhì)形成細(xì)胞胞漿內(nèi)的損傷線粒體數(shù)量，抑制TCE所致的皮膚損傷，從而可能達(dá)到對(duì)TCE所致BALB/c裸鼠皮膚損傷的保護(hù)作用。 4、TCE導(dǎo)致BALB/c裸鼠皮膚內(nèi)的氧化應(yīng)激水平的增加，抗氧化酶SOD的活性降低，在急性皮膚刺激試驗(yàn)和累積性皮膚刺激試驗(yàn)中可能發(fā)揮一定的作用。 5、VE和