2,5-己二酮誘導大鼠神經(jīng)組織細胞凋亡及其分子機制研究.pdf

1、目的:觀察正己烷的終毒物2，5-己二酮(HD)暴露大鼠神經(jīng)組織細胞凋亡發(fā)生頻率，探討神經(jīng)生長因子(NGF)介導PI3K/AKT信號通路在HD誘導大鼠神經(jīng)組織細胞凋亡的作用。
　　材料和方法:40只雄性SD大鼠購于大連醫(yī)科大學試驗動物中心，稱重并按隨機數(shù)表法分為4組。將HD溶于0.9％無菌生理鹽水，用腹腔注射方法對大鼠進行染毒。試驗組的染毒劑量分別為100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg，注射量為0.3ml/10

2、0 g;對照組以相同劑量生理鹽水腹腔注射。染毒時間為5周，每周5次。試驗期間，每周末對各組大鼠步態(tài)進行神經(jīng)行為學評價;用肌電圖與誘發(fā)電位儀檢測各組大鼠尾神經(jīng)遠端潛伏期(DL)和神經(jīng)傳導速度(MCV)。TUN EL-Hoe chst雙染色法，觀察各組大鼠脊髓神經(jīng)細胞凋亡發(fā)生頻率;用Western-Blotting免疫印跡技術，檢測各組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織NGF、Akt、p-Akt(ser-473)、Bad和p-Bad(ser-136)蛋

3、白的相對表達水平;用Real-time RT-PCR技術，檢測各組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織NGF基因相對表達水平。試驗結果用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結果:對照組大鼠體重在試驗過程中逐漸增長，第5周觀察結束時，平均體重最初平均體重增加了23.96％(P＜0.05)，100 mg/kg HD染毒組大鼠體重與對照組之間無顯著性差異(P＞0.05)，200 mg/kg HD染毒組大鼠體重約為對照組的75.59％(P＜0.

4、05），400 mg/kg HD染毒組大鼠體重從染毒第1周開始就處于負增長狀態(tài)，至試驗結束時動物嚴重消瘦，平均體重僅為對照組的39.70％(P＜0.05)。染毒第5周，100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg HD染毒組大鼠的步態(tài)評分值分別為1.80，2.80和3.94，顯著高于對照組(P＜0.01）。染毒第5周，100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg HD染毒組大鼠尾神經(jīng)傳導潛伏期比同時期對照組分

5、別提高了5.67％、30.67％和75.51％，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);200 mg/kg和400 mg/kg HD染毒組大鼠尾神經(jīng)傳導速度與同期對照組相比分別降低30.30％(P＜0.01)和44.45％(P＜0.01）。TUNEL-Hoechst雙染色結果顯示，100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kgHD染毒組的凋亡指數(shù)（AI）分別為5.34％、12.45％和21.56％，與對照組相比，差異均有統(tǒng)計學意

6、義(P＜0.05)。Real-time RT-PCR檢測結果顯示，與對照組相比，100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg HD暴露組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織的NGFmRNA表達量顯著降低(P＜0.05），而且呈現(xiàn)劑量-反應關系。Western-Blotting檢測結果顯示，HD暴露各組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織中NGF蛋白表達水平明顯低于對照組(P＜0.05），且呈劑量依賴性降低;HD暴露各組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織中Akt和

7、Bad蛋白表達量與對照組比較，均無顯著性差異(P＞0.05），而HD暴露各組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織中p-Akt(ser-473)和p-Bad(ser-136)的蛋白表達量顯著低于對照組(P＜0.05），且呈現(xiàn)劑量-反應關系。
　　結論:HD暴露可誘導大鼠神經(jīng)組織細胞凋亡;顯著下調大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織NGF基因和蛋白表達;顯著下調大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織p-Akt和p-Bad蛋白表達。結果提示，抑制NGF介導的PI3K/AKT信號轉