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1、目的:構(gòu)建攜帶mTERT啟動(dòng)子和m4-1BBL基因的重組腺病毒,為探討治療肝細(xì)胞肝癌的方法提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。觀察mTERT啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的m4-1BBL基因?qū)π∈篌w內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)的抑制作用,探討其治療潛力。 方法:應(yīng)用細(xì)菌內(nèi)同源重組法構(gòu)建重組腺病毒載體質(zhì)粒pAd-mTERT-promoter-m4-1BBL,我們將得到的重組腺病毒載體質(zhì)粒pAd-mTERT promoter-m4-1BBL經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞,獲得重組腺病毒。同樣方法
2、得到空載體rAd病毒。我們用rAd-mTERT promoter-m4-1BBL、rAd感染小鼠肝癌細(xì)胞株Hepa1-6;用RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染重組腺病毒后腫瘤細(xì)胞中m4-1BBL和mTERT promoter基因的表達(dá)情況。建立C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型。我們觀察8周,測(cè)定腫瘤的體積、重量、抑瘤效果。免疫組化檢測(cè)目的基因的表達(dá)情況。 結(jié)果:成功構(gòu)建mTERT啟動(dòng)子和m4-1BBL基因的重組腺病毒rAd- mTERT-pr
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