DNA指紋技術(shù)對(duì)近交系小鼠生產(chǎn)擴(kuò)大群的遺傳檢測(cè).pdf

1、近交系小鼠具有遺傳的穩(wěn)定性和表型的一致性，越來越多地應(yīng)用于科學(xué)研究中。但由于在近交系小鼠的繁育過程中容易發(fā)生遺傳污染或突變，應(yīng)用這樣的動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，不僅會(huì)造成經(jīng)濟(jì)浪費(fèi)，而且可能得出錯(cuò)誤的結(jié)論，因此加強(qiáng)對(duì)近交系小鼠遺傳質(zhì)量的檢測(cè)非常必要。長期以來，應(yīng)用于近交系小鼠遺傳質(zhì)量檢測(cè)的方法主要有：皮膚移植法、毛色基因檢測(cè)及生化位點(diǎn)檢測(cè)技術(shù)等。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，DNA指紋技術(shù)已初步被應(yīng)用于近交系小鼠的遺傳質(zhì)量檢測(cè)。本文通過DNA指紋技術(shù)在近

2、交系小鼠生產(chǎn)擴(kuò)大群遺傳檢測(cè)中的應(yīng)用研究，并與生化位點(diǎn)標(biāo)記分析法進(jìn)行比較，旨在篩選出具有精確、可靠、特異性好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳檢測(cè)方法，為建立分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)采用生物素標(biāo)記的(GGAT)4寡核苷酸探針對(duì)C57BL/6J、BALB/c和DBA/2三個(gè)近交系擴(kuò)大群種鼠進(jìn)行了DNA指紋分析，發(fā)現(xiàn)在2.2Kb-9.4Kb之間均出現(xiàn)了10條以上清晰可見、易于判別的圖譜條帶。同一品系近交系小鼠DNA指紋圖帶

3、相一致，其相似系數(shù)為0.95-1.0；而不同品系近交系小鼠的DNA指紋圖帶差異很大，其相似系數(shù)僅為0.21-0.35。結(jié)果證明生物素標(biāo)記的(GGAT)4寡核苷酸探針具有高度多態(tài)性，用其標(biāo)記的DNA指紋技術(shù)能夠?qū)幌敌∈筮M(jìn)行遺傳監(jiān)測(cè)。 近交系小鼠生產(chǎn)擴(kuò)大群只能繁殖四代，第五代可能出現(xiàn)遺傳污染。因此，本研究采用生物素標(biāo)記的(GGAT)4寡核苷酸探針對(duì)第四代和第五代擴(kuò)大群繁育的C57BL/6J、BALB/c和DBA/2三個(gè)近交品系的

4、小鼠進(jìn)行了遺傳質(zhì)量檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)第四代近交系小鼠品系內(nèi)DNA指紋圖帶相一致，其相似系數(shù)為0.95-1.0。而第五代近交系小鼠DNA指紋圖帶有差異，其相似系數(shù)為0.67-0.79。這表明第四代擴(kuò)大群沒有發(fā)生遺傳突變或污染，而第五代擴(kuò)大群已發(fā)生遺傳突變或污染。 生化標(biāo)記方法是國標(biāo)規(guī)定的近交系小鼠遺傳監(jiān)測(cè)的一種常用方法。通過對(duì)蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心生產(chǎn)擴(kuò)大群繁育的C57BL/6J、BALB/c和DBA/2三個(gè)近交系擴(kuò)大群的第四代和第五代進(jìn)行

5、常規(guī)生化標(biāo)記分析，發(fā)現(xiàn)被檢的十三個(gè)生化基因位點(diǎn)(Cfar-2，Es-1，Es-3，Gpil，Hbb，Idh-1，Trf，Ce-2，Es-10，Mod-1，Pgm-1，Gpd-1 and Akp-1)中，三個(gè)近交品系小鼠第四代的生化基因位點(diǎn)與國標(biāo)完全一致。第五代的生化基因位點(diǎn)中，BALB/c小鼠的十三個(gè)生化基因位點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)一致；DBA/2小鼠有一個(gè)位點(diǎn)即Idh-1出現(xiàn)異常；C57BL/6小鼠的十個(gè)生化基因位點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)一致，有三個(gè)位點(diǎn)即1dh-

6、1、Es-3、Es-1出現(xiàn)異常。將C57BL/6J、BALB/c和DBA/2近交系小鼠第四代和第五代的DNA指紋圖與常規(guī)生化標(biāo)記分析法比較，發(fā)現(xiàn)DNA指紋技術(shù)顯示異常的群體生化標(biāo)記分析未見異常，生化標(biāo)記分析顯示可疑或異常的群體內(nèi)DNA指紋圖差異明顯，表明DNA指紋技術(shù)在近交系小鼠擴(kuò)大群遺傳檢測(cè)中比生化標(biāo)記分析更加靈敏。 為了解近交系擴(kuò)大群小鼠的各項(xiàng)血液指標(biāo)變化情況，本研究對(duì)近交系擴(kuò)大群小鼠的第一代至第五代近交系小鼠進(jìn)行了血液分析