兩種探針DNA指紋圖對(duì)小鼠遺傳檢測(cè)的比較研究.pdf

1、目的：探討用人工合成的兩種非放射性標(biāo)記的寡聚核苷酸探針制作的 DNA 指紋圖在近交系小鼠遺傳檢測(cè)中的應(yīng)用，并通過(guò)比較，分析兩種探針的可靠性和穩(wěn)定性。為進(jìn)一步完善DNA指紋技術(shù)，使其得到更加廣泛的發(fā)展，并為近交系小鼠遺傳檢測(cè)方法的改進(jìn)、建立標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)小鼠 DNA 指紋數(shù)據(jù)庫(kù)用于不同地區(qū)實(shí)驗(yàn)室間的使用和參考提供重要信息。 方法：采用人工合成的兩種生物素標(biāo)記的探針 (GGAT)<,4>、(GTG)<,5>以及Southern雜交的方

2、法制作BALB/c、C57BL/6J、DBA/2、C3H近交系小鼠的DNA指紋圖，對(duì)這4個(gè)品系的小鼠進(jìn)行遺傳檢測(cè)。通過(guò)分析品系內(nèi)小鼠和不同品系小鼠DNA指紋圖的平均圖帶數(shù)、圖帶大小、平均相似系數(shù)(x)、平均等位基因頻率(q)、各品系的品系特異性帶數(shù)(S)及在不同探針下所占百分比(S/T)、相同DNA指紋圖的概率(P)等，比較兩種探針的重復(fù)性和優(yōu)越性。 結(jié)果：在所檢測(cè)的 4 個(gè)近交系小鼠的品系中，兩種探針都表現(xiàn)出品系內(nèi)個(gè)體DNA

3、指紋圖譜的帶型基本一致，不同品系間帶型差別明顯。用不同的探針得到的指紋圖是完全不一樣的。兩種探針對(duì)BALB/c、C57BL/6J、DBA/2、C3H 4種近交系小鼠產(chǎn)生的DNA指紋圖的平均圖帶數(shù)均為8～12條，且大部分分布在2 kb以上，具有良好的多態(tài)性。品系內(nèi)平均DNA指紋圖相似系數(shù)在0.92～1.00的范圍內(nèi)，具有相同指紋圖的概率均在3.1×10<'-1>以上，極顯著地高于品系間的相似系數(shù)和相同指紋圖的概率(x=0.22～0.39，

4、P<1.07×10<'-4>)。另外，(GTG)<,5>探針得到的品系特異性帶數(shù)百分比略高于(GGAT)<,4>探針。 結(jié)論：用非放射性標(biāo)記的人工合成的寡聚核苷酸探針(GGAT)<,4>以及(GTG)<,5>所得到的DNA指紋圖遺傳變異靈敏度高，穩(wěn)定性好，探針來(lái)源容易，雜交時(shí)間短，操作簡(jiǎn)便，并可檢測(cè)出個(gè)體或品系間的遺傳距離，同時(shí)非放射性標(biāo)記技術(shù)可避免放射性同位素的污染。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)(GTG)<,5>探針的重復(fù)性和穩(wěn)定性比(GGA