補(bǔ)體抑制劑對(duì)近交系大鼠同種心臟移植急性排斥反應(yīng)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的和背景：目前治療終末期心臟病最切實(shí)有效的方法仍然是心臟移植，而免疫抑制劑的開(kāi)發(fā)應(yīng)用使近年來(lái)器官移植得以飛速發(fā)展，但毒副作用和對(duì)全身免疫系統(tǒng)的抑制同時(shí)也帶來(lái)新的問(wèn)題，如致命性的感染或惡性腫瘤以及免疫抑制劑的毒性作用造成相應(yīng)的器官功能障礙或移植物喪失功能。當(dāng)供體不可避免的受到宿主免疫系統(tǒng)的攻擊時(shí)，急性排斥反應(yīng)的發(fā)生使移植心急性或慢性的失功，影響移植效果。為保障移植效果而又不全面抑制受者的免疫反應(yīng)情況下，能夠調(diào)節(jié)供、受體之間的特異性免

2、疫耐受應(yīng)該是器官移植抗排斥反應(yīng)最好的、最終的解決方式。而傳統(tǒng)移植免疫認(rèn)為在同種移植急性排斥反應(yīng)主要是由T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫起主要作用，有研究顯示調(diào)節(jié)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫耐受并不能保護(hù)慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生，隨著移植免疫機(jī)制研究的進(jìn)展，逐步認(rèn)識(shí)到體液免疫中非特異性的補(bǔ)體系統(tǒng)在同種器官移植排斥反應(yīng)中可能發(fā)揮十分重要的作用。國(guó)外Pratt等通過(guò)補(bǔ)體抑制即可對(duì)同種腎移植的急性排斥反應(yīng)發(fā)生有很好的抑制效果，我們前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)純化的云南眼鏡蛇毒因子能有效的抑制

3、封閉群大鼠同種心臟移植急性排斥反應(yīng)，延長(zhǎng)移植心存活時(shí)間，部分移植心長(zhǎng)期存活(＞60d)，該結(jié)果表明CVF不僅具有傳統(tǒng)理論上的抗超急排作用，而且能顯著抑制急性排斥反應(yīng)，并出現(xiàn)部分移植心長(zhǎng)期存活的驚人結(jié)果，這可能是CVF通過(guò)目前不明的機(jī)理誘導(dǎo)了免疫耐受，但也不能排除是由封閉群大鼠的遺傳背景差異性所導(dǎo)致。本實(shí)驗(yàn)擬在建立近交系大鼠腹部異位心臟移植急性排斥反應(yīng)的經(jīng)典動(dòng)物模型下，通過(guò)運(yùn)用眼鏡蛇毒因子(CVF)消耗補(bǔ)體進(jìn)一步觀(guān)察補(bǔ)體抑制對(duì)同種移植急性

4、排斥反應(yīng)的發(fā)生的影響，并初步探討CVF抗同種心臟移植急性排斥反應(yīng)的作用機(jī)制。 方法： 本研究主要進(jìn)行了以下三方面工作： 1、應(yīng)用改良Ono術(shù)式建立近交系Brown/Norway-Lewis大鼠同種異位心臟移植動(dòng)物模型。 2、將小劑量CVF應(yīng)用于Lewis大鼠，用CH50法測(cè)定大鼠注射CVF后血清補(bǔ)體活性隨時(shí)間變化的規(guī)律。 3、分為對(duì)照組(手術(shù))和干預(yù)組(手術(shù)+CVF20ug·kg-1·d-2)，對(duì)

5、比觀(guān)察CVF消耗血清補(bǔ)體對(duì)移植心存活的影響；分別采集術(shù)后1、3、5、6d移植心臟，HE染色觀(guān)察不同時(shí)間點(diǎn)移植心臟組織病理變化；免疫組織化學(xué)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)移植心臟的C3及CD3+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)。 結(jié)果： 1、成功建立了近交系大鼠同種異位心臟移植動(dòng)物模型。 2、大鼠尾靜脈注射小劑量CVF2h血清補(bǔ)體活性即顯著下降，并于6h達(dá)到最低，此后1-2d基本保持在10％以下，4d恢復(fù)到23.50％，8d恢復(fù)正常(68.81％

6、)。 3、實(shí)驗(yàn)組移植心臟存活時(shí)間較對(duì)照組顯著延長(zhǎng)(p＜0.01)，由原來(lái)的6.65±0.34d延長(zhǎng)到11.69±0.71d；病理檢查提示移植心病理?yè)p害較同期對(duì)照組明顯減輕，免疫組織化學(xué)檢測(cè)證實(shí)，實(shí)驗(yàn)組1-6d血管壁及心肌組織內(nèi)未見(jiàn)C3沉著，內(nèi)皮細(xì)胞未見(jiàn)腫脹、壞死，而同期對(duì)照組血管壁及基底層均可見(jiàn)不同程度的C3沉著，血管內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、壞死；實(shí)驗(yàn)組CD3+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)情況較對(duì)照組同期明顯減輕。 結(jié)論： 1、近交