外源性IL-10、TGF-β1對大鼠小腸同種異體移植急性排斥反應的影響.pdf

1、第一部分 大鼠節(jié)段性小腸移植模型的建立;目的:自1971年Monchik成功建立大鼠小腸移植模型以來,經(jīng)過多種來的改進,大鼠小腸移植成為小腸移植實驗研究最常用的動物模型,然而大鼠小腸移植是一項難度較大的實驗外科技術(shù),完成穩(wěn)定的模型需要一定的經(jīng)驗和手術(shù)技巧.該實驗擬建立穩(wěn)定的大鼠節(jié)段性小腸移植模型.方法:手術(shù)要點如下:取供體小腸長約20cm,供應血管:動脈為帶部分復主動脈段的腸系膜動脈,靜脈為門靜脈.供體手術(shù):通過結(jié)扎切斷腎動脈和腰動脈游

2、離腸系膜根部的腹主動脈,全身肝素化后4℃肝素林格氏液原位灌洗小腸至小腸顏色變白,盡可能縮短熱缺血時間.動脈由帶腸系膜動脈和部分腹主動脈的血管袖組成,門靜脈在其分支上方切斷,取下小腸,修剪.受體手術(shù):游離下腔靜脈和腹主動脈,并在左腎血管的下方用血管夾阻斷.供體的門靜脈端側(cè)吻合與受體的下腔靜脈,然后動脈端吻合.移植小腸的兩端均外置,在腹壁造瘺,關(guān)腹.血管吻合在放大10倍顯微鏡下進行.結(jié)論:1.大鼠節(jié)段性小腸移植模型成功率高,是觀察小腸移植穩(wěn)

3、急性排斥反應的良好模型.2.移植小腸的血管吻合技術(shù)是小腸移植的關(guān)鍵,需要一定的操作經(jīng)驗.3.移植中需防止受體過多失血、失液.4.供腸的獲取應減少供腸的損傷,縮短熱缺血時間.第二部分 外源性IL-10對大鼠小腸同種異體移植急性排斥反應的影響;方法:建立大鼠同種異體小腸移植模型.實驗分三組 Ⅰ組:Wistar大鼠→SD大鼠小腸移植.Ⅱ組:Wistar大鼠→SD大鼠小腸移植+環(huán)孢素A(CsA)治療.Ⅲ組:Wistar大鼠→SD大鼠+重組大鼠白

4、細胞介素-10(rrIL-10)治療.每組試驗動物6只.分別于術(shù)后3、5、7天取部分移植小腸,觀察移植小腸的病理學變化,多疫組化檢測移植小腸CD4、CD8的表達,半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(Semi-quantity reverse transcription polymerase chain rcaction,RT-PCR)檢測移植小腸中細胞因子IL-2、IFN-γmRNA的轉(zhuǎn)錄水平.結(jié)論:1 SD大鼠與Wistar大鼠之間進行小腸移植

5、可以觀察到典型的小腸移植急性排斥反應,其發(fā)生比較肯定.2 移植小腸CD4、CD8的表達與大鼠小腸同種異體移植的急性排斥反應有關(guān).3. IL-2、IFN-γmRNA的轉(zhuǎn)錄水平反應大鼠小腸同種異體移植急性排斥反應的程度.4.外源性rrIL-10可抑制大鼠小腸同種異體移植的急性排斥反應,可能與移植小腸的免疫耐受有關(guān).第三部分 外源性TGF-β1對大鼠小腸同種異體移植急性排斥反應的影響;該實驗擬觀察外源性轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transformin

6、g growth factor-β1,TGF-β1)對大鼠同種異體小腸移植急性排斥反應的影響.方法:建立大鼠同種異體移植模型.實驗分三組 Ⅰ組:Wistar大鼠→SD大鼠小腸移植.Ⅱ組:Wistar大鼠→SD大鼠小腸移植+環(huán)孢素A(CsA)治療.Ⅲ組:Wistar大鼠→SD大鼠+重組人轉(zhuǎn)化生長因子β1(rhTGF-β1)治療.每組試驗動物6只.分別于術(shù)后3、5、7天取部分移植小腸.常規(guī)HE染色觀察移植小腸的急性排斥反應.免疫組化檢測移植