高糖對INS-1細胞TXNIP表達的影響及NAC、Ex-4的保護作用.pdf

1、實驗目的:
　　 研究高糖狀況下INS-1細胞中硫氧環(huán)蛋白相互作用蛋白(TXNIP)的表達水平，對胰島素轉(zhuǎn)錄因子MafA、胰島素基因的影響。N-乙酰半胱氨酸(NAC)、艾塞那肽(Ex-4)對TXNIP、胰島素轉(zhuǎn)錄因子MafA、胰島素基因的影響，以期探討糖尿病新機制。
　　 實驗方法:
　　 以含11.1mmol/l 葡萄糖的RPM1-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)INS-1細胞，當細胞生長至80[％]融合時，分別轉(zhuǎn)入含有4.

2、0mmol/l 葡萄糖(NG組)、16.7mmol/l 葡萄糖(HG組)
　　 及16.7mmol/l 葡萄糖+10mmol/l NAC(HG+N組)、16.7mmol/L 葡萄糖+100nmol/lEx-4(HG+E組)的RPM1-1640培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)48小時，離心收集細胞，Trizol提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA,然后以real-time PCR法檢測TXNIP、胰島素基因及轉(zhuǎn)錄因子MafA的mRNA 水平。

3、　　 實驗結(jié)果:
　　 1. 高糖對TXNIP mRNA、Insulin mRNA及MafA mRNA表達的影響HG組與NG組比較，TXNIP mRNA的表達上升了9.5倍(0.593±0.028vs0.062±0.013，p<0.001，n=3)；胰島素基因mRNA表達下降了83[％](2.986±0.247vs17.821±1.275，p<0.001，n=3)；而MafA mRNA表達下降了85[％](0.362±0.06

4、4vs2.426±0.331，p<0.001，n=3)。差異均有統(tǒng)計學意義。
　　 2. NAC對TXNIP mRNA、Insulin mRNA及MafA mRNA表達的影響HG+N組與HG組比較，TXNIP mRNA的表達則下降了4.77倍(0.124±0.054vs0.593±0.028，p<0.001，n=3)；HG+N組與HG組相比，Insulin mRNA提高了5.40倍(16.097±0.746vs2.986±0.2

5、47，p<0.001，n=3)，而MafA mRNA的表達提高了6.22倍(2.240±0.334vs0.362±0.064，p<0.001，n=3)。差異均有統(tǒng)計學意義。
　　 3. Ex-4對TXNIP mRNA、Insulin mRNA及MafA mRNA表達的影響HG+E組與HG組比較，TXNIP mRNA的表達則下降了7.78倍(0.076±0.01309vs 0.59298±0.028，p<0.001，n=3)；HG

6、+E組與HG組相比，Insulin mRNA的表達升高了5.66倍(16.970±0.869vs2.986±0.247，p<0.001，n=3)，而MafA mRNA的表達提高了6.92倍(2.489±0.322vs0.362±0.064，p<0.01，n=3)；差異有統(tǒng)計學意義。
　　 4. 而HG+N組、HG+E組無論是TXNIP 還是胰島素基因、MaFA表達與NG組比較均無顯著差異。
　　 實驗結(jié)論: