低聚氨基寡糖對腺嘌呤誘導慢性腎衰竭大鼠的保護作用研究.pdf

1、目的：慢性腎衰竭（chronic rennal failure，CRF）是多種慢性腎病發(fā)展的最終結(jié)局，是腎實質(zhì)損害至晚期的危重綜合征。CRF早期腎臟肥大，腎小球和腎小管間質(zhì)間的細胞外基質(zhì)的累積，最終發(fā)生腎小球硬化，腎間質(zhì)纖維化及腎小管萎縮。由于慢性腎臟疾病的病理病機復雜，目前對其發(fā)病機制尚不清楚，還沒有任何有效的治療方法以延緩和治療慢性腎臟疾病，最終導致CRF是毫無疑問的。
　　腎小管間質(zhì)纖維化是各種慢性腎臟病的共同病理機制，由于

2、尿毒素和轉(zhuǎn)分化的影響造成正常功能的腎小管上皮細胞(renal tubular epithelial cells, RTECs)減少或消失。因此建立體外RTECs的原代培養(yǎng)方法，對體外研究導致腎臟疾病和失調(diào)的因素和機制及篩選治療藥物至關(guān)重要。
　　甲殼寡糖和殼寡糖（COS），是一類低聚合度水溶性的氨基寡糖類，克服了高分子量甲殼素和殼聚糖的高度不溶性，具有獨特的生物生理活性。研究表明殼寡糖在治療急性腎衰竭方面取得了良好的研究成果。但是

3、甲殼寡糖和COS對腺嘌呤誘導CRF的作用研究報道很少，因此本論文選擇甲殼寡糖和COS，研究其對腺嘌呤誘導的慢性腎功能衰竭大鼠的保護作用，為生物醫(yī)學界研究 CRF的病理機制提供理論依據(jù)。
　　方法：在動物水平上，以Wistar大鼠為研究對象，通過建立慢性腎衰竭大鼠模型研究了低聚氨基寡糖對慢性腎衰竭大鼠的保護作用。用灌胃腺嘌呤羧甲基纖維素鈉懸濁液的方法，建立了大鼠慢性腎衰竭動物模型，設定尿毒清顆粒組作為陽性對照組及三個不同劑量的殼寡糖

4、、甲殼寡糖實驗組對大鼠進行每天灌胃。觀察記錄大鼠一般生活狀態(tài)，在灌胃低聚氨基寡糖的不同時間段取大鼠血清及腎臟，稱重計算腎臟重量系數(shù)，制備腎組織勻漿液，測定大鼠血清生化因子血清肌酐(Serum creatinine，SCr)、尿素氮(Blood urea nitrogen，BUN)和腎臟組織勻漿中總超過氧化物酶（Total Superoxide Dismutase，T-SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione Oxidase，

5、GSH-Px)活性，評價低聚氨基寡糖對慢性腎衰竭大鼠的腎功能及抗氧化性的影響。留取腎臟組織固定，制作組織切片，HE染色觀察，分析低聚氨基寡糖對大鼠腎臟組織的保護作用。
　　在細胞水平上，用網(wǎng)篩加酶消化法分離大鼠腎小管上皮細胞（RTECs），通過體外培養(yǎng)大鼠RTECs，應用 MTT法研究殼寡糖對其生長的影響。
　　結(jié)果：動物實驗中，慢性腎衰竭大鼠動物模型的SCr、BUN比正常對照組大鼠明顯升高，有顯著性差異，大鼠慢性腎衰竭動物

6、模型建立成功。殼寡糖、甲殼寡糖灌胃后殼寡糖-L、甲殼寡糖-H組在降低血清SCr、BUN和提高腎組織中T-SOD、GSH-Px活性方面效果較好，相對與模型對照組，血清 SCr、BUN水平分別降低100％/63.75%、63.75%/52.93%，腎組織中T-SOD、GSH-Px活力分別升高63.36%/62.41%、82.16%/55.90%，總體比尿毒清顆粒組效果好。組織學觀察結(jié)果表明，模型組大鼠腎實質(zhì)病變嚴重，腎小管變性擴張，腎小球變

7、性系膜增厚，灌胃殼寡糖和甲殼寡糖明顯緩解了大鼠腎臟組織中腎實質(zhì)損傷。
　　細胞實驗中，成功分離出RTECs，原代培養(yǎng)至9-10長滿至復層，消化接種后，MTT法COS在125-500μg/mL范圍內(nèi)，有不同程度的促進RTECs生長的作用，效果最顯著的是250μg/mL。其結(jié)果解釋了動物實驗中COS能夠緩解腎實質(zhì)損傷，改善腎功能的作用。
　　結(jié)論：殼寡糖和甲殼寡糖對腺嘌呤誘導的慢性腎功能衰竭大鼠有一定的保護作用，能夠改善腎組織，