氯通道在癲癇發(fā)病機(jī)制中作用的研究.pdf

1、目的：研究C1C-2、C1C-3氯通道(voltage-gated chloride channel)在大鼠海馬結(jié)構(gòu)中的分布特征，以及在氯化鋰-匹羅卡品大鼠慢性癲癇模型中分布和表達(dá)的變化，并探討這種分布和表達(dá)變化的意義，進(jìn)一步揭示氯通道在癲癇發(fā)作病理機(jī)制中的作用。 方法：80只Wistar。大鼠隨機(jī)分組，60只用于復(fù)制氯化鋰．匹羅卡品大鼠慢性癲癇模型，觀察行為學(xué)改變，在發(fā)作后24小時(shí)、14日、30日時(shí)間點(diǎn)，根據(jù)分組分別予以

2、：(1)4％多聚甲醛灌注固定取腦用于免疫組化染色，觀察C1C-2、C1C-3氯通道蛋白在海馬表達(dá)的分布情況及其致癇后不同時(shí)點(diǎn)的光密度值的變化；(2)快速斷頭取腦，分離海馬用于RT-PCR，觀察C1C-2、C1C-3氯通道m(xù)RNA在海馬中致癇后不同時(shí)點(diǎn)的變化。 結(jié)果：致癇組動(dòng)物根據(jù)致癇后行為學(xué)和腦電圖改變可分為急性期(6～24h)、靜止期(7～42天，平均14.5±5.9天)、慢性期。免疫組化染色顯示：(1)C1C-2免疫反

3、應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞見(jiàn)于海馬CA1-CA3區(qū)，齒狀回顆粒細(xì)胞未見(jiàn)染色。致癇后24小時(shí)，C1C-2免疫反應(yīng)產(chǎn)物的分布特征及平均光密度值無(wú)明顯變化；致癇后14天至一個(gè)月，C1C-2免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物的分布特征無(wú)明顯變化，但定量結(jié)果顯示免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)和平均光密度值顯著減少和降低(P<0.05)。(2)C1C-3免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞在海馬結(jié)構(gòu)各部分布無(wú)明顯差異，致癇后24小時(shí)，C1C-3免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物的分布特征無(wú)明顯變化，定量結(jié)果顯示海馬CA1-CA3

4、及齒狀回各層免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)和平均光密度值顯著增加和升高(P<0.05)；致癇后14天與致癇后一個(gè)月，C1C-3免疫反應(yīng)產(chǎn)物的分布特征及平均光密度值與對(duì)照組比較無(wú)明顯變化(P>0.05)。RT-PCR顯示：(1)大鼠海馬結(jié)構(gòu)內(nèi)clc-2氯通道m(xù)RNA在氯化鋰．匹羅卡品致癇后24小時(shí)未見(jiàn)明顯變化(P>0.05)；致癇后14天，C1C-2mRNA表達(dá)降低(P<0.05)，此種現(xiàn)象在致癇后一個(gè)月時(shí)仍持續(xù)。(2)大鼠海馬結(jié)構(gòu)內(nèi)C1C-3氯通

5、道m(xù)RNA在氯化鋰-匹羅卡品致癇后24小時(shí)表達(dá)明顯增加(P<0.05)；致癇后14天，CIC-3mRNA表達(dá)與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(P>0.05)；致癇后一個(gè)月C1C-3mRNA表達(dá)與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論：C1C-2氯通道在氯化鋰．匹羅卡品大鼠模型急性發(fā)作期無(wú)明顯變化，在急性發(fā)作期的致癇機(jī)制中無(wú)明顯作用，發(fā)作對(duì)其表達(dá)也無(wú)明顯影響；C1C-2氯通道在氯化鋰-匹羅卡品大鼠模型慢性發(fā)作期表達(dá)明顯減少，推測(cè)慢性期