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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
建立快速、靈敏的血清腺苷脫氨酶勻相法(Adenosine Deaminase,ADA)檢測(cè)新技術(shù)。
方法:
通過酶催化反應(yīng)動(dòng)力學(xué)體系選擇、表面活性劑選擇、液體酶穩(wěn)定條件、近中性體系下熒光、化學(xué)發(fā)光法實(shí)驗(yàn)條件的選擇等關(guān)鍵技術(shù)研究,建立了嘌呤核苷磷酸化酶-黃嘌呤氧化酶-過氧化物酶(PNP-XTO-POD)偶聯(lián)可見光勻相終點(diǎn)法測(cè)定血清ADA、PNP-XTO-POD偶聯(lián)單一試劑可見光勻相速率法測(cè)
2、定血清ADA、嘌呤核苷磷酸化酶-黃嘌呤氧化酶-尿酸酶-過氧化物酶(PNP-XTO-UAO-POD)偶聯(lián)雙試劑可見光勻相速率法測(cè)定血清ADA、PNP-XTO-POD偶聯(lián)熒光勻相終點(diǎn)法測(cè)定血清ADA、PNP-XTO-POD偶聯(lián)化學(xué)發(fā)光勻相終點(diǎn)法測(cè)定血清ADA的新方法。
結(jié)果:
PNP-XTO-POD偶聯(lián)可見光勻相終點(diǎn)法測(cè)定血清ADA,線性范圍為0.10~140.00U/L,平均回收率為100.30%,批內(nèi)變異系數(shù)
3、(CV)和批間變異系數(shù)分別為0.018~0.032和0.031~0.037,與美國(guó)Diazyme Laboratores提供的ADA連續(xù)監(jiān)測(cè)法比較具有良好的相關(guān)性,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=1.0023X-0.0953,r=0.9998,與全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版速率法比較具有良好的相關(guān)性,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=0.9982X+0.2915,r=0.9996,膽紅素少于20.00mg/dL、甘油三酯少于750.00mg
4、/dL、血紅蛋白少于100.00mg/dL、抗壞血酸少于4.00mg/dL對(duì)37.00U/L腺苷脫氨酶測(cè)定無干擾,250例健康人群的血清ADA活性為3.90~20.30U/L。
PNP-XTO-POD偶聯(lián)單一試劑可見光勻相速率法測(cè)定血清ADA,線性范圍為0.08~129.00U/L,平均回收率為99.40%,批內(nèi)變異系數(shù)(CV)和批間變異系數(shù)分別為0.013~0.031和022~0.041,與美國(guó)Diazyme Labor
5、atores提供的ADA檢測(cè)試劑方法比較具有良好的相關(guān)性,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=0.9999X+0.0545,r=0.9973,與全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版速率法比較具有良好的相關(guān)性,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y:1.0001X-0.0300,r=0.9990,膽紅素少于22.00mg/dL、甘油三酯少于780.00mg/dL、血紅蛋白少于100.00mg/dL、抗壞血酸少于4.00mg/dL對(duì)37.00U/L腺苷脫氨酶測(cè)定
6、無干擾,250例健康人群的血清ADA活性為3.90~20.30U/L。
PNP-XTO-UAO-POD偶聯(lián)雙試劑可見光勻相速率法測(cè)定血清ADA,線性范圍可達(dá)0.05~129.00U/L,平均回收率為101.70%,批內(nèi)變異系數(shù)(CV)和批間變異系數(shù)分別為0.011~0.029和0.025~0.034,與美國(guó)Diazyme Laboratores提供的ADA連續(xù)監(jiān)測(cè)法比較具有良好的相關(guān)性,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=0.
7、9951X+0.6074,r=0.9990,與全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版速率法比較具有良好的相關(guān)性,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=0.9990X+0.2716,r=0.9993,膽紅素少于22.00mg/dL、甘油三酯少于780.00mg/dL、血紅蛋白少于100.00mg/dL、抗壞血酸少于4.00mg/dL對(duì)37.00U/L腺苷脫氨酶測(cè)定無干擾,250例健康人群的血清ADA活性為3.90~20.30U/L。
PNP-
8、XTO-POD偶聯(lián)熒光勻相終點(diǎn)法測(cè)定血清ADA,線性范圍為0.01~100.40U/L,平均回收率為99.04%,批內(nèi)變異系數(shù)(CV)和批間變異系數(shù)分別為0.016~0.037和0.021~0.043,與美國(guó)Diazyme Laboratores提供的ADA連續(xù)監(jiān)測(cè)法比較具有良好的相關(guān)性,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=1.0029X+0.0054,r=0.9980,與全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版速率法比較具有良好的相關(guān)性,線性回歸方程和
9、相關(guān)系數(shù)分別為Y=1.0033X+0.0087,r=0.9987,膽紅素少于25.00mg/dL、甘油三酯少于750.00mg/dL、血紅蛋白少于120.00mg/dL、抗壞血酸少于4.00mg/dL對(duì)37.00U/L腺苷脫氨酶測(cè)定無干擾,250例健康人群的血清ADA活性為3.90~20.30U/L。
PNP-XTO-POD偶聯(lián)化學(xué)發(fā)光勻相終點(diǎn)法測(cè)定血清ADA,線性范圍為0.001~129.00U/L,平均回收率為100.
10、07%,批內(nèi)變異系數(shù)(CV)和批間變異系數(shù)分別為0.049~0.058和0.055~0.072,與美國(guó)Diazyme Laboratores提供的ADA連續(xù)監(jiān)測(cè)法比較具有良好的相關(guān)性,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=0.9708X+1.1671,r=0.9990,與全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第三版速率法比較具有良好的相關(guān)性,線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為Y=0.9975X-0.5811,r=0.9990,膽紅素少于25.00mg/dL、甘油三酯
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