肉桂醛與鹽酸小檗堿及其聯(lián)合氟康唑抗白念珠菌作用的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討肉桂醛(Cinnamicaldehyde,CIN)、鹽酸小檗堿(BerberineHydrochloride,BER)單獨(dú)和聯(lián)合氟康唑(Fluconazole,FLC)抗白念珠菌作用及其機(jī)制。
　　方法:
　　1.參照體外藥物敏感試驗(yàn)M27-A方案及棋盤格法:①檢測(cè)不同pH值的培養(yǎng)基及菌懸液濃度對(duì)藥物MIC80(80％最低抑菌濃度)的影響;②檢測(cè)肉桂醛、鹽酸小檗堿和氟康唑抗白念珠菌的作用,獲得各藥物單獨(dú)抗菌時(shí)的MI

2、C80;③檢測(cè)肉桂醛、鹽酸小檗堿和氟康唑分別兩兩聯(lián)合時(shí),測(cè)定單藥的MIC聯(lián)(藥物兩兩聯(lián)合時(shí),單藥的抑菌濃度)及藥物聯(lián)合作用時(shí)的部分抑菌濃度(Fractionalinhibitoryconcentration,FIC)及FIC指數(shù)(FICindex,FICI)。
　　2.根據(jù)測(cè)定藥物的MIC80濃度及聯(lián)合時(shí)的MIC聯(lián)濃度,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組。
　　3.藥物單獨(dú)及聯(lián)合作用白念珠菌后:①通過血清芽管形成實(shí)驗(yàn),觀察藥物對(duì)白念珠菌的芽管形成

3、能力影響;②通過粘附人口腔粘膜上皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn),觀察藥物對(duì)白念珠菌粘附人口腔粘膜上皮細(xì)胞的能力的影響;③通過蛋黃培養(yǎng)基,檢測(cè)藥物對(duì)白念珠菌的細(xì)胞外磷脂酶活性的影響;④通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction,RT-PCR)技術(shù)及凝膠分析軟件bandscan4.3,檢測(cè)藥物對(duì)白念珠菌PLB1基因的mRNA表達(dá)水平差異。
　　結(jié)果:
　　1.藥物對(duì)白念珠菌的作用

4、為:①在pH分別為:3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0和9.0的RPMI1640培養(yǎng)基條件下,CIN對(duì)白念珠菌的MIC80值分別為:640、1280、640、320、320、320和160μg/mL;BER對(duì)白念珠菌的MIC80值分別為:160、320、160、80、80、80和20μg/mL;FLC對(duì)白念珠菌的MIC80值分別為:32、64、64、16、16、16和4μg/mL。當(dāng)白念珠菌濃度分別為:5.0×102、5.0

5、×103、5.0×104、5.0×105、5.0×106和5.0×107CFU/mL的條件下,CIN對(duì)白念珠菌的MIC80值分別為:40、80、80、160、320和320μg/mL;BER對(duì)白念珠菌的MIC80值分別為:5、5、10、20、80和80μg/mL;FLC對(duì)白念珠菌的MIC80值分別為:2、2、4、4、8和16μg/mL;②肉桂醛、鹽酸小檗堿和氟康唑單獨(dú)對(duì)白念珠菌的MIC80分別為:320、80和16μg/mL;③藥物分別

6、兩兩聯(lián)合時(shí):CIN(MIC聯(lián)=80μg/mL)與BER(MIC聯(lián)=20μg/mL)聯(lián)合時(shí)FICI≤0.5,CIN(MIC聯(lián)=80μg/mL)與FLC(MIC聯(lián)=4μg/mL)聯(lián)合時(shí)FICI≤0.5,BER(MIC聯(lián)=20μg/mL)與FLC(MIC聯(lián)=4μg/mL)聯(lián)合時(shí)FICI≤0.5。
　　2.將實(shí)驗(yàn)分為:對(duì)照組(無(wú)藥物處理)及試驗(yàn)組CIN80μg/mL、BER20μg/mL、FLC4μg/mL、CIN320μg/mL、BER

7、80μg/mL、FLC16μg/mL、CIN80μg/mL與BER20μg/mL、CIN80μg/mL與FLC4μg/mL、BER20μg/mL與FLC4μg/mL。
　　3.將各組的藥物分別與白念珠菌單獨(dú)或聯(lián)合作用后:①各實(shí)驗(yàn)組的白念珠菌芽管生成率分別為:85.45%、65.77%、49.36%、53.34%、44.29%、51.52%、36.52%、29.28%、17.56%和6.07%,均低于對(duì)照組(P<0.05),且藥物聯(lián)

8、合組的白念珠菌芽管生成率低于藥物單用組(P<0.05)。②各實(shí)驗(yàn)組的白念珠菌對(duì)口腔粘膜上皮細(xì)胞的粘附率分別為:100%、96.67%、94.00%、93.33%、88.67%、84.75%、72.56%、44.39%、23.33%和11.41%,均低于對(duì)照組(P<0.05),且藥物聯(lián)合組的粘附率低于藥物單用組(P<0.05)。③通過蛋黃培養(yǎng)基檢測(cè)處理后的白念珠菌細(xì)胞外磷脂酶活力(Pz值)分別為:0.446、0.576、0.529、0.5

9、85、0.614、0.602、0.687、0.688、0.706和0.793,均低于對(duì)照組(P<0.05),且藥物聯(lián)合組的細(xì)胞外磷脂酶活力低于藥物單用組(P<0.05)。④各實(shí)驗(yàn)組的白念珠菌PLB1基因在mRNA的相對(duì)表達(dá)量水平分別為:0.950、0.903、0.847、0.849、0.794、0.781、0.708、0.631、0.536和0.364,均低于對(duì)照組(P<0.05),且藥物聯(lián)合組的PLB1基因在mRNA的相對(duì)表達(dá)量水平低

10、于藥物單用組(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.肉桂醛、鹽酸小檗堿及氟康唑單獨(dú)作用于白念珠菌時(shí),其MIC80對(duì)其生長(zhǎng)有明顯的抑制作用;藥物分別兩兩聯(lián)合時(shí),FICI<0.5,單藥的最低抑菌濃度MIC80明顯降低,且兩種藥物聯(lián)合時(shí)具有協(xié)同作用,能顯著抑制白念珠菌的生長(zhǎng)。
　　2.藥物聯(lián)合作用白念珠菌時(shí),比藥物單用的抑制作用好,其作用機(jī)制表現(xiàn)為:①藥物聯(lián)合應(yīng)用組,白念珠菌芽管的形成能力及粘附口腔粘膜上皮細(xì)胞的能力明顯低于