熱帶念珠菌氟康唑耐藥機(jī)制及粉防己堿對其逆轉(zhuǎn)作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:
   隨著免疫缺陷人群的增多,侵襲性真菌感染的發(fā)病率不斷增高,在某些地區(qū)熱帶念珠菌已成為僅次于白念珠菌的第二位常見念珠菌。而近年來,熱帶念珠菌對常用抗真菌藥物氟康唑的耐藥率呈上升趨勢,耐藥性已成為影響臨床治療熱帶念珠菌感染療效的主要原因。因此,研究熱帶念珠菌耐藥性的形成機(jī)制和尋找逆轉(zhuǎn)其耐藥性的有效藥物是一項極其緊迫的課題。
   目的:
   探討臨床分離的熱帶念珠菌氟康唑耐藥性的機(jī)制及粉防己堿對其耐藥性

2、的逆轉(zhuǎn)作用,為尋找和研究氟康唑耐藥熱帶念珠菌的治療提供理論依據(jù)。
   方法:
   1、收集太原市中心醫(yī)院檢驗科微生物室2010年1月—10月分離的200株念珠菌,并采用PCR-RFLP 技術(shù)對其進(jìn)行鑒定,即應(yīng)用真菌的通用引物對核糖體DNA內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)序列進(jìn)行擴(kuò)增,MspⅠ酶切其PCR 產(chǎn)物,以鑒定到種;
   2、運用ATB FUNGUS 3 藥敏板條檢測41株熱帶念珠菌對常用抗真菌藥物的敏感性;

3、PCR 擴(kuò)增氟康唑耐藥菌株和敏感菌株靶酶基因ERG11基因并進(jìn)行測序分析;RT-PCR 檢測其靶酶基因ERG11和外排基因CDR1、MDR1mRNA表達(dá)情況;
   3、MTT 法測定TET對氟康唑耐藥熱帶念珠菌臨床分離菌株的最大非細(xì)胞毒性濃度,藥敏試驗分析非細(xì)胞毒性劑量的粉防己堿對5株氟康唑耐藥熱帶念珠菌氟康唑MIC值的影響,流式細(xì)胞術(shù)檢測其對熱帶念珠菌Rh123的蓄積能力的影響,RT-PCR分析粉防己堿作用前后,外排基因CD

4、R1、MDR1及靶酶基因ERG11mRNA的表達(dá)的變化。
   結(jié)果:
   1、應(yīng)用PCR-RFLP 方法對200株臨床分離念珠株進(jìn)行鑒定,共分離出白色念珠菌128株(64.0%),熱帶念珠菌41株(20.5%),光滑念珠菌11株(5.5%),近平滑念珠菌13株(6.5%),克柔念珠菌7株(3.5%),與微生物自動分析儀鑒定結(jié)果一致;
   2、41株熱帶念珠菌對5-氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伏立康唑和伊曲

5、康唑的耐藥率分別為2.4%、0%、12.2%、7.3%、26.8%;ERG11基因測序結(jié)果顯示,熱帶念珠菌氟康唑耐藥株ERG11基因共存在4 處錯義突變(R245K兩處,Y221F、V362I 各一處),敏感菌株中沒有發(fā)現(xiàn)錯義突變;耐藥菌株的ERG11、CDR1和MDR1基因mRNA的表達(dá)量均高于敏感菌株;
   3、TET對熱帶念珠菌的最大非細(xì)胞毒性劑量濃度為20μg/ml;經(jīng)此濃度的TET作用后,氟康唑?qū)?株耐藥性熱帶念珠菌

6、的MIC的范圍由64-128μg/ml 減少到16-64μg/ml,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;粉防己堿作用組中,熱帶念珠菌對Rh123的蓄積量明顯高于對照組;RT-PCR 結(jié)果顯示,粉防己堿可以下調(diào)耐藥性熱帶念珠菌CDR1和MDR1基因mRNA水平的表達(dá),但對ERG11基因的表達(dá)無明顯作用。
   結(jié)論:
   1、PCR-RFLP 技術(shù)是鑒定臨床常見念珠菌的有效手段,具有快速、準(zhǔn)確、特異性高等優(yōu)點;
   2、熱帶念珠

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