精制抗新城疫病毒卵黃抗體的研制.pdf

1、多年來，高免卵黃抗體在我國實(shí)際畜牧業(yè)生產(chǎn)中得到了極為廣泛的應(yīng)用，并取得了肯定的療效，但由于制備卵黃抗體的高免蛋大部分為非SPF蛋，存在造成多種蛋生傳染病傳播的隱患，同時(shí)其含有大量蛋白質(zhì)、磷脂等大分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，容易引起注射后難以吸收，并會(huì)造成腫脹、出血、壞死甚至嚴(yán)重的過敏反應(yīng)，以上的缺陷限制了其的大規(guī)模臨床使用以及作為新獸藥生物制品制劑的可能。本試驗(yàn)以抗新城疫粗制高免卵黃抗體為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，對(duì)卵黃抗體進(jìn)行脫脂和外源性病毒滅活的處理，以求研究

2、出既適合大規(guī)?；a(chǎn)需要又符合新獸藥生物制品申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)的精制卵黃抗體生產(chǎn)工藝。首先對(duì)卵黃抗體進(jìn)行脫脂處理，采用乙酸—乙酸鈉緩沖液(pH為5.0，濃度為0.05mol／1)沉淀法結(jié)合超濾法、以及微量表面活性劑沉淀法(PLONIc)兩種方法去除卵黃抗體中的脂肪。然后，采用C<,o>60輻照法、溫度滅活法兩種方法進(jìn)行外源性病毒的滅活處理，并參考人用血液制品的外源病毒滅活檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)精制卵黃抗體的外源性病毒滅活效果進(jìn)行檢驗(yàn)，最后對(duì)精制卵黃液進(jìn)行了安

3、全檢驗(yàn)和動(dòng)物應(yīng)用試驗(yàn)。結(jié)果表明：卵黃原液用0.05mol／1，pH5.0的乙酸—乙酸鈉緩沖液1：9倍稀釋，攪拌20min，4℃靜置10小時(shí)后，5000轉(zhuǎn)／min離心30min，回收上清，然后所得上清液經(jīng)分子量為100KD的有機(jī)陶瓷膜超濾后，截留抗體總回收率為83.5％；在卵黃原液與生理鹽水的1：3混合液中加入一定量的PLONIC，使其終濃度為0.89％，攪拌20min，4℃靜置6小時(shí)后，1000轉(zhuǎn)／min離心30min，所的抗體回收率為

4、87％。去脂后的卵黃抗體液經(jīng)6KGY的C060射線輻照后，性狀穩(wěn)定，抗體效價(jià)不損失，對(duì)添加的EDS-76指示病毒(HA=2<'6>)的滅活效果達(dá)到了滅活標(biāo)準(zhǔn)要求；同時(shí)去脂后的卵黃抗體液用60℃水浴10h，處理后性狀穩(wěn)定，對(duì)添加的法氏囊指示病毒(10<'6.ELD<,50>／ml)的滅活效果也達(dá)到了滅活標(biāo)準(zhǔn)要求。同時(shí)抗體液無菌，無支原體，無外源性病毒和白血病病毒存在，對(duì)雞胚和14日齡雛雞安全，抗體消長動(dòng)態(tài)試驗(yàn)表明去脂滅活抗體液普遍達(dá)到峰值