血管交感神經(jīng)的NO通路及對(duì)VSMC增殖的影響.pdf

1、研究目的:探討血管交感神經(jīng)的NO通路及對(duì)VSMC增殖的影響
　　 實(shí)驗(yàn)方法：
　　 建模與實(shí)驗(yàn)分組:取雄性SD鼠30只,體重250克±20克,手術(shù)暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈,在頸總動(dòng)脈上放置-2×1mm含有1μl2.16mol/LFeCl3的濾紙,放置20min,建立平滑肌增殖模型。隨機(jī)分為4組(1)模型存活1d組；(2)5d組；(3)LNNA組,建模前一天開始,兩次腹腔注射LNNA15mg/(kg·d),連續(xù)注射6天；(4)假手

2、術(shù)組:在2×1mm濾紙上加生理鹽水1μl代替FeCl3。其中5d組12只動(dòng)物,其它組6只,從5d組中取6只大鼠作FG逆行追蹤,注射頸總動(dòng)脈3只；注射頸上神經(jīng)節(jié)3只。
　　 FG逆行追蹤:SD大鼠10只,體重240克±20克,隨機(jī)分成兩組。大鼠仰臥位,沿頸部正中線剪開約3cm的切口,其中一組暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈鞘,用連接微量注射器的玻璃微管往動(dòng)脈外膜和中膜間緩慢注射1μl1％FG,留針15分鐘；另一組在右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈的交叉處暴

3、露頸上神經(jīng)節(jié),往頸上神經(jīng)節(jié)內(nèi)緩慢注射1μl1％FG,留針15分鐘。存活一周后灌注取材。
　　 NADPH-d酶組織化學(xué)染色:脊髓和神經(jīng)節(jié)切片入NADPH-d酶液37℃孵育1h(孵育液含:0.3％TritonX-100；0.1g/L硝基四唑氮藍(lán)(NBT)；1.0g/Lβ-NADPH),切片移入0.01M PBS洗5min×3次,裱片,自然干燥,酒精梯度脫水,二甲苯透明,中性樹脂封片；注射FG的NADPH-d酶組織化學(xué)染色切片用液體

4、石蠟封片,熒光顯微鏡下觀察。
　　 結(jié)果：
　　 一、NO神經(jīng)通路:頸上、中、下神經(jīng)節(jié)都有FG標(biāo)記細(xì)胞,但頸上神經(jīng)節(jié)標(biāo)記細(xì)胞多于頸中、下神經(jīng)節(jié)；脊髓T1-T3節(jié)段中間外側(cè)核有FG標(biāo)記細(xì)胞,用注射FG的切片去染NADPH-d酶組織化學(xué),結(jié)果顯示頸上神經(jīng)節(jié)和脊髓節(jié)段FG標(biāo)記陽(yáng)性的細(xì)胞均為NADPH-d陽(yáng)性細(xì)胞,表明支配頸總動(dòng)脈的頸上神經(jīng)節(jié)含NO神經(jīng)。
　　 二、NADPH陽(yáng)性神經(jīng)元的變化:在脊髓5d組NADPH陽(yáng)性神

5、經(jīng)元比假手術(shù)組明顯增多(P<0.005),1d組也有增多,但無(wú)顯著差異(P>0.05)；而用NOS抑制劑組中間外側(cè)核的NADPH陽(yáng)性神經(jīng)元與5d組相比明顯減少(P<0.05)。頸交感神經(jīng)節(jié)正常情況下有少量NADPH表達(dá),在損傷血管造成平滑肌增殖模型1d和5d組,NADPH細(xì)胞比假手術(shù)組有增多,特別5d組更明顯(P<0.05),而NOS抑制劑組(LNNA)神經(jīng)節(jié)中的NADPH陽(yáng)性細(xì)胞比5d組明顯減少(P<0.05)。
　　 三、平

6、滑肌增殖變化:頸總動(dòng)脈的HE染色表明,血管受損后一天平滑肌就開始增殖,5天增殖明顯,這種變化趨勢(shì)與在頸交感神經(jīng)節(jié)和脊髓側(cè)角NOS陽(yáng)性神經(jīng)元的增多變化是一致。用了NOS抑制劑組(LNNA)脊髓側(cè)角和神經(jīng)節(jié)中的NADPH細(xì)胞明顯減少,而血管平滑肌增殖抑制劑組比沒有用抑制劑的組更明顯。
　　 結(jié)論：
　　 1.頸總動(dòng)脈的交感神經(jīng)由頸交感神經(jīng)節(jié)支配,其中以頸上神經(jīng)節(jié)為主。
　　 2.支配頸總動(dòng)脈的交感神經(jīng)含NO遞質(zhì),并支