Foxp3、IL-35在巨細(xì)胞病毒感染新生小鼠中的表達(dá)及更昔洛韋的干預(yù)作用.pdf

1、目的：1.觀察叉頭狀/翅狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3(Forkhead/winged helix transcriptionfactor Foxp3)、白介素-35(Interleukin-35 IL-35)在鼠巨細(xì)胞病毒(Murinecytomegalovirus MCMV)感染的新生小鼠中的時序性表達(dá)，明確巨細(xì)胞病毒感染后調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(T regulatory cell Treg)、IL-35的變化及相互影響。2、觀察更昔洛韋對新生小鼠MCMV

2、感染的治療作用，明確IL-35在MCMV感染中的作用。
　　方法：新生BALB/C小鼠按窩隨機(jī)分為空白組、病毒組、GCV組3組，每組分3 d、7 d、14 d3個亞組，每亞組8只，病毒組和GCV組分別于小鼠出生24 h內(nèi)腹腔接種TCID50為105-31/ml的MCMV病毒懸液20μ1，自病毒接種后24 h為0d，GCV組在接種病毒懸液24 h后給予GCV60 mg/kg每日1次腹腔注射，同時病毒組和空白對照組分別給予同：等劑量的

3、生理鹽水作為對照，分別于第3、7、14 d斷頭取血采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzsane linked immunosorbent assay ELISA)方法測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase ALT)、IL-35含量，留取肝臟石蠟切片進(jìn)行組織病理學(xué)觀察，同時提取肝臟MCMV-DNA進(jìn)行PCR檢測，提取肝臟、脾臟組織總RNA利用RT-PCR檢測Foxp3、EBi3 mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1接種病

4、毒后小鼠生長發(fā)育情況及肝組織病理改變：病毒組小鼠自接種MCMV后進(jìn)行性出現(xiàn)明顯食欲差、活動少；皮毛稀松、對刺激反應(yīng)遲鈍、生長遲緩、體重不增等表現(xiàn)。光鏡下肝臟病理改變：MCMV感染新生小鼠第3d時肝臟組織HE染色可見炎性細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞腫脹變性，表現(xiàn)為體積變大、胞漿空淡；第7d時病變加重達(dá)高峰，可見大泡性脂肪變，大量炎性細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞片狀壞死；在第14d仍保持較高水平。GCV治療組第3 d時肝臟HE染色與病毒組類似，第7 d時肝臟HE染

5、色亦可見大泡性脂肪變、炎性細(xì)胞浸潤，但第14 d時肝細(xì)胞腫脹、變性較病毒組明顯好轉(zhuǎn)，仍有炎性細(xì)胞浸潤。
　　2病毒組肝臟組織MCMV-DNAPCR電泳在第3、7、14 d時均出現(xiàn)陽性條帶；空白組肝臟組織MCMV-DNA PCR電泳各時間點(diǎn)均未見陽性條帶；GCV組MCMV-DNAPCR亦出現(xiàn)陽性條帶，但是亮度較同時間點(diǎn)病毒組明顯變?nèi)酢?br>　　3 ELISA：①ELIsA檢測血清ALT表達(dá)水平示：與正常對照組相比，病毒組小鼠ALT

6、水平在第3 d時明顯升高，在第7 d時達(dá)高峰，第14 d時下降，同時間點(diǎn)兩組比較差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與病毒組相比，GCV組ALT第3 d時即有明顯下降，第7 d時進(jìn)一步下降，第14 d時接近正常，同時間點(diǎn)兩組比較差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；同時間點(diǎn)空白組及GCV組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。②ELISA檢測血清IL-35表達(dá)水平示：第3 d時病毒組血清IL-35水平較空白組及GCV組稍增高，組間兩兩比較

7、差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，第7 d時病毒組血清IL-35表達(dá)較空白組及GCV組減低，組間兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，第14 d時病毒組血清IL-35水平較空白組及GCV組明顯減低，和空白組及GCV組比較差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。病毒組第3 d和第14 d IL-35水平比較差：異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4 RT-PCR：PCR條帶顯示第3 d時病毒組肝臟組織Foxp3、EBi3 mRN

8、A表達(dá)均增高，和同時間點(diǎn)空白組與GCV組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，第7 d時Foxp3、EBi3mRNA表達(dá)開始減低，和空白組與GCV組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，第14 d時Foxp3、EBi3 mRNA表達(dá)明顯減低，和空白組及GCv組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，病毒組第3 d時和第14 d時Foxp3、EBi3mRNA表達(dá)差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，脾臟組織Foxp3、EBi3mRNA表達(dá)和肝