肺泡巨噬細胞A至I RNA編輯酶1在LPS誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷中的作用.pdf

1、本課題在上述研究基礎(chǔ)上，進一步深入觀察了肺泡巨噬細胞(AlveolarMacrophages，AMs)在脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷(AcuteLungInjury,ALI)中的作用，A-to-IRNA編輯酶1(AdenosineDeaminasesActingRNA1，ADAR1)在AMs中表達的規(guī)律，ADAR1對AMs分泌致炎和抗炎因子的影響，以及AMs中ADAR1基因Knock-down后

2、對ALI發(fā)生的影響。旨在從一個全新的角度探索LPS誘導(dǎo)ALI發(fā)病的分子機理，同時也對ADAR1與感染性疾病發(fā)生之間的相互關(guān)系進行開創(chuàng)性的嘗試。 本研究有以下主要發(fā)現(xiàn)： 1.LPS誘導(dǎo)ALI肺內(nèi)AMs數(shù)量增加和誘導(dǎo)AMs中ADAR1的表達氣管內(nèi)滴注LPS(2.5mg/kg)制備的ALI大鼠模型，其肺泡灌洗液(BronchoalveolarLavageFluid，BALF)中AMs總數(shù)由對照組的1.89×106增加至炎癥反應(yīng)

3、3h的9.09×106，6h的4.22×106，并維持至12h。RT-PCR檢測到AMs中ADAR1mRNA表達在炎癥早期3h起即顯著增加可持續(xù)至12h。 2.LPS誘導(dǎo)肺泡NR8383巨噬細胞中ADAR1的表達1μg/mlLPS刺激NR8383巨噬細胞1h起，ADAR1mRNA表達增加即可達到峰值，可持續(xù)至12h。蛋白印跡檢測顯示，ADAR1i表達呈現(xiàn)時間依賴性增加，LPS刺激3h時出現(xiàn)高峰，而ADAR1c的變化則不明顯。AD

4、AR1i表達增加趨勢與RT-PCR結(jié)果一致，但高峰時間推后至炎癥刺激的3h。 3.NR8383巨噬細胞中ADAR1基因knock-down后對MIP-1及IL-10的分泌的影響采用RNAi方法將ADAR1基因knock-down，可顯著性降低LPS刺激NR8383巨噬細胞時MIP-1的分泌量，由143.12降低至68(ng/106cells)，而IL-10的分泌量則由86.75升高至95.14(ng/106cells)。提示AD

5、AR1部分參與了NR8383巨噬細胞分泌細胞因子。 4.NR8383巨噬細胞中ADAR1基因knock-down后對LPS誘導(dǎo)ALI發(fā)生的影響采用過繼轉(zhuǎn)移的細胞—動物模型(AdoptiveTransfer，AT)觀察到，體外經(jīng)LPS激活的NR8383巨噬細胞輸注入大鼠氣管內(nèi)可誘發(fā)ALI；將NR8383巨噬細胞中的ADAR1基因表達knock-down后經(jīng)LPS刺激輸注大鼠氣管內(nèi)，大鼠BALF滲入的炎性細胞總數(shù)、肺泡氣-動脈血氧分

6、壓差(Alveolar-arterialOxygenDifferenceAnalysis，D(A-a)O2)顯著減小，減輕了ALI的發(fā)病。提示，LPS激活的NR8383巨噬細胞可誘發(fā)ALI，ADAR1基因knock-down后可減輕ALI。 研究結(jié)論：LPS誘導(dǎo)的ALI中AMs數(shù)量顯著增加；AMs中的ADAR1在LPS刺激時顯著增加；ADAR1基因knock-down后能夠顯著抑制NR8383巨噬細胞分泌MIP-1的量，而增加I