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文檔簡介
1、目的:
1.研究化學(xué)合成的AMH-siRNA作用卵巢顆粒腫瘤細(xì)胞COV434后AMH基因表達(dá)的情況;探討siRNA沉默AMH基因的效果;
2.研究AMH-siRNA對卵巢顆粒腫瘤細(xì)胞COV434中SCF基因表達(dá)的影響,探討siRNA作用下AMH沉默對SCF表達(dá)的影響。
方法:
1.將化學(xué)合成的4個特異性Hs_AMHFlexiTube siRNA序列,一個Negative siRNA序列,用轉(zhuǎn)染試劑
2、HiperFectRTransfection Reagent瞬時轉(zhuǎn)染COV434細(xì)胞。實驗分組:空白對照組(未轉(zhuǎn)染)、陰性對照組(Negative siRNA轉(zhuǎn)染)、實驗組(AMH-siRNA轉(zhuǎn)染);通過熒光定量PCR(Q-PCR)檢測空白對照組和siRNA轉(zhuǎn)染24h后AMH mRNA表達(dá),選擇沉默效果最好的AMH-siRNA用于后續(xù)試驗研究;
2.將篩選出的siRNA轉(zhuǎn)染COV434細(xì)胞,分組同前,使用熒光定量PCR和免疫熒
3、光化學(xué)技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染24h后細(xì)胞中SCF mRNA及蛋白表達(dá)變化;免疫熒光化學(xué)技術(shù)檢測細(xì)胞中AMH蛋白表達(dá)變化。
結(jié)果:
1.4個AMH-siRNA均能有效沉默COV434細(xì)胞中AMH mRNA的表達(dá),以AMH-4-siRNA的沉默效果最為明顯;與空白對照組及陰性對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);
2.免疫熒光檢測結(jié)果顯示AMH-4-siRNA轉(zhuǎn)染24h后AMH蛋白表達(dá)水平降低,與空白對照組及陰性
4、對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);.Q-PCR和免疫熒光檢測結(jié)果顯示AMH-4-siRNA轉(zhuǎn)染24h后SCF mRNA及蛋白表達(dá)水平增高,與空白對照組及陰性對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);
3.Negative siRNA轉(zhuǎn)染后AMH和SCF mRNA及蛋白的表達(dá)水平無明顯變化,與空白對照組及陰性對照組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);
結(jié)論
1.4條AMH-siRNA均能有
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