RAD001聯合唑來膦酸治療肺腺癌骨轉移的實驗研究.pdf

1、目的：骨轉移是目前晚期肺癌最主要的轉移方式之一，已經成為肺癌臨床診療中的重要負擔。唑來膦酸是目前治療骨轉移的主要藥物之一，能夠顯著延緩由骨轉移引起的骨相關事件，同時唑來膦酸有一定的抗腫瘤作用。RAD001（依維莫司）是繼雷帕霉素后新一代mTOR抑制劑，目前已證實在多種腫瘤中具有明顯的抗腫瘤作用。本研究通過聯合唑來膦酸和RAD001兩種藥物，通過細胞和動物水平探討兩種藥物的抗腫瘤的協同作用。
　　 方法：⑴用RAD001、唑來膦酸

2、、RAD001 聯合唑來膦酸分別處理具有不同骨轉移潛能的肺癌細胞株A549、H460、SPC-A1，采用四甲基偶氮唑藍（MTT）法檢測細胞增殖情況；流式細胞儀檢測細胞周期變化及細胞凋亡率；Western-Blotting 方法比較p70S6K、p-p70S6K 蛋白的變化。⑵將人肺腺癌高骨轉移細胞株SPC-A-1BM 接種于40 只等體重的BALB/c 裸小鼠左心室，制成骨轉移瘤模型。40 只荷瘤小鼠隨機分為四組，每組10 只。接種后第

3、4 天開始用藥，分別為唑來膦酸、RAD001、唑來膦酸聯合RAD001 和生理鹽水對照，共用藥3 周。每個小鼠每周稱體重2 次,記錄生存情況。至第7 周放血處死小鼠，留取血清樣本，ELISA法檢測血清I 型膠原氨基末端肽（NTX）水平；骨ECT 核素掃描、X 線攝片，檢測骨轉移部位和數量；病理切片檢查；留取骨轉移病灶，行轉移灶Western-Blotting 檢查，通路分子p70S6K、p-p70S6K 在不同用藥組中的表達情況。

4、>　　 結果：RAD001 與唑來膦酸聯合較單藥唑來膦酸或RAD001 能夠顯著抑制A549、H460、SPC-A1 三組細胞株的增殖。流式細胞檢測顯示，各腫瘤細胞在聯合用藥干預后早期細胞凋亡率明顯上升。聯合用藥組被阻滯在G0-G1 期的細胞明顯增多。Western-Blotting 顯示聯合用藥組較單藥組對p-p70S6K 抑制作用明顯，而對 p70S6K 的抑制作用較單藥組抑制差異不顯著。聯合治療組和RAD001 組最早出現體重下

5、降，唑來膦酸組和對照組體重先升后降，聯合組和RAD001 組死亡時小鼠體重與唑來膦酸組和對照組相比，體重差異有統(tǒng)計學意義（死亡平均體重：聯合組13.73 g，RAD001 組 14.38g, 唑來膦酸組 16.24g ,對照組 16.63g，P=0.00）.聯合組生存時間最長，中位生存時間為42 天，RAD001 組其次，為41 天，唑來膦酸組中位生存時間為34 天，對照組生存時間為29 天。聯合組與對照組生存時間有統(tǒng)計學差異（P=0.

6、00）。首次核素顯像顯示：治療組(聯合組及RAD001 組)與對照組相比骨轉移均有顯著差異（p＝0.017）,但唑來膦酸組和對照組無顯著統(tǒng)計學差異（P=0.348）；X 線結果顯示，對照組骨轉移數量最多，其次為唑來膦酸組，RAD001 組和聯合組骨轉移數量最少，但組間未見統(tǒng)計學差異（P=0.118 ）。骨轉歸生物標記物－I 型膠原氨基末端肽(NTX)檢測：唑來膦酸組、聯合組降低了NTX 水平，而以聯合組與對照組有顯著差異（p＝0.026