唑來膦酸及其與多西他賽聯(lián)合運用對前列腺癌PC-3細胞體外作用的實驗研究.pdf

1、目的和研究背景：
　　前列腺癌是男性泌尿生殖系統(tǒng)常見腫瘤之一，在美國占男性腫瘤死亡率第二位，近年來在我國的發(fā)病率和死亡率也是逐年升高。前列腺癌是對雄激素依賴的腫瘤，所以大多數(shù)前列腺癌患者剛開始對于祛除雄激素治療有效，但約50％-60％患者在接受內(nèi)分泌治療后的18-24個月后會轉(zhuǎn)變成為激素難治性前列腺癌(Hormonerefractoryprostatecancer，HRPC)。
　　而HRPC患者骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生率高達65-75

2、％，骨是最易產(chǎn)生遠處轉(zhuǎn)移的組織。唑來膦酸(zoledronicacid，ZOL)是目前唯一被證實能減少前列腺癌骨轉(zhuǎn)移以及骨相關(guān)事件發(fā)生率，并能持久緩解疼痛的雙磷酸鹽藥物。通過研究發(fā)現(xiàn)，唑來膦酸不但能通過抑制破骨細胞的活動和增殖，對抗腫瘤細胞的骨轉(zhuǎn)移，還有直接抑制腫瘤細胞生長的作用(乳腺癌、骨肉瘤等腫瘤細胞)。目前，晚期前列腺癌患者的治療一直是困擾臨床泌尿外科的一個難題，而唑來膦酸對腫瘤細胞的增殖抑制作用的特性，無疑為臨床治療HRPC患者

3、提供了新的思路，它與目前公認的HRPC一線化療藥物多西他賽(docetaxel，DOC)聯(lián)合應(yīng)用能否產(chǎn)生協(xié)同作用更加成為了人們關(guān)注的課題。
　　目前國內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域的研究尚處于基礎(chǔ)研究階段。國外部分研究已證實，唑來膦酸主要通過甲羥戊酸途徑起到抗腫瘤的作用。而對唑來膦酸和多西他賽聯(lián)合用藥的基礎(chǔ)研究則更少。兩者聯(lián)合運用于乳腺癌細胞的研究提示其具有協(xié)同抗腫瘤作用，而對于前列腺癌的作用在最新的腫瘤學(xué)雜志上也開始出現(xiàn)零星的報道(ActaOnl

4、ocogia)，但資料還是非常有限。
　　本研究的目的正是為進一步驗證唑來膦酸對激素非依賴性前列腺癌PC-3細胞系的抗腫瘤作用，同時探討唑來膦酸與多西他賽聯(lián)合應(yīng)用于PC-3細胞是否具有協(xié)同作用，并通過對被抑制腫瘤細胞的細胞周期分布的影響，來揭示其抗腫瘤作用的可能機制，為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法和結(jié)果：
　　1.MTT比色法觀察ZOL對前列腺癌PC-3細胞的增殖抑制作用
　　本部分研究用不同濃度的ZOL(6

5、.25μg/m1-400μg/ml)作用于體外培養(yǎng)的PC-3細胞，藥物作用2小時后，換正常細胞培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，在72小時后采用噻唑蘭(MTT)比色法檢測細胞增殖活性。結(jié)果表明，ZOL可以顯著抑制PC-3細胞的增殖，這種作用隨著藥物濃度的增加而增強。在100μg/ml的濃度下，PC-3細胞抑制率達到19.0％，在200μg/ml濃度下抑制率達到44.5％，而400μg/ml濃度時則達到了57.9％。光鏡下觀察到細胞濃度明顯降低。
　

6、　2.MTT比色法觀察ZOL與DOC聯(lián)合應(yīng)用對前列腺癌PC-3細胞的增殖抑制作用
　　本部分研究采用不同濃度的ZOL(藥物作用2小時)與10ng/ml、100ng/ml濃度下DOC(藥物作用24小時)聯(lián)合作用于體外培養(yǎng)的PC-3細胞，換正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)48小時后采用噻唑蘭(MTT)比色法檢測細胞增殖活性。結(jié)果表明，ZOL與DOC具有聯(lián)合抑制細胞增殖的作用，在DOC濃度條件不變情況下，這種增殖抑制作用隨著ZOL藥物濃度的增加而增強

7、。在10ng/ml濃度DOC條件時，200μg/ml濃度ZOL可抑制49.3％的PC-3細胞，400μg/ml時抑制率達到61.4％：在100ng/ml濃度的DOC條件時，200μg/ml濃度ZOL的細胞抑制率達到59.7％，400μg/ml時抑制率達到74.2％。光鏡下細胞密度明顯降低，且伴有細胞質(zhì)減少的表現(xiàn)。
　　3.流式細胞儀檢測PC-3細胞周期的分布變化
　　本部分研究將PC-3細胞接種于6孔板內(nèi)培養(yǎng)，過夜貼壁后，用

8、不同濃度的ZOL作用2h，換正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)72h。胰酶消化處理后收集離心，放入70％冰乙醇后制成單細胞懸液，采用流式細胞儀分析細胞周期分布及細胞凋亡率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)前列腺癌PC-3細胞的自然凋亡率為0.73％，G1、S、G2期的細胞比例分別是61.2％、36.61％、2.13％。經(jīng)過400μg/mlZOL處理后的細胞凋亡率是5.93％，G1、S、G2期的細胞比例分別是45.71％、48.45％、5.83％。經(jīng)過ZOL處理后細胞凋亡增加，

9、而G1期細胞明顯減少，S期細胞明顯增加，G2期細胞有所增加。
　　結(jié)論：
　　本實驗通過對ZOL、DOC作用前列腺癌PC-3細胞后的細胞增殖活性觀察以及細胞周期的分布變化情況，驗證了ZOL對非雄激素依賴性前列腺癌PC-3細胞具有明顯的增殖抑制作用，誘導(dǎo)細胞凋亡，并能使PC-3細胞出現(xiàn)細胞周期停滯在S期以及G2期。且這種作用與ZOL的濃度呈正相關(guān)的關(guān)系。研究同時發(fā)現(xiàn)唑來膦酸與多西他賽聯(lián)合作用于PC-3細胞較唑來膦酸或者多西他賽