內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)高脂飲食和棕櫚酸誘導(dǎo)的血管損傷及非諾貝特的干預(yù).pdf

1、目的：
　　1.觀察高脂飲食（HFD）能否誘導(dǎo)SD大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)舒縮功能變化及其病理學(xué)改變，以及非諾貝特（FF）是否能夠保護(hù)血管。
　　2.研究棕櫚酸（PA）是否減弱正常雌性大鼠內(nèi)皮依賴性血管舒張反應(yīng)及誘導(dǎo)小鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（MAEC）產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)，以及非諾貝特酸（FA）的保護(hù)作用是否與緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。
　　方法：
　　1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分：依據(jù)隨機(jī)分配原則，將雌性大鼠隨機(jī)分為正常飲食組（SCD

2、）、高脂飲食組（HFD）和HFD加非諾貝特治療組（HFD+FF），以5個(gè)月高脂飲食建立SD大鼠高脂血癥模型，非諾貝特灌胃治療2個(gè)月。每周稱量大鼠體重，測(cè)定血清生化指標(biāo)TG、TC、HDL-C、LDL-C，氣相色譜法（GC）檢測(cè)FFA、PA含量，硝酸還原酶法檢測(cè)內(nèi)皮功能紊亂指示劑NO生成變化；HE染色研究胸主動(dòng)脈病理學(xué)改變，Weigert染色檢測(cè)胸主動(dòng)脈彈力纖維變化，油紅O染色檢測(cè)脂質(zhì)沉積；RT-PCR分析胸主動(dòng)脈中CHOP及GRP78基因

3、表達(dá)的改變；Western blot法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物CHOP、GRP78的蛋白表達(dá)以及ERK、ERK磷酸化，JNK、JNK磷酸化和eNOS和eNOS的磷酸化水平變化；血管張力實(shí)驗(yàn)觀察梯度濃度乙酰膽堿（ACh）對(duì)血管環(huán)的作用變化。
　　2.體外實(shí)驗(yàn)部分：以正常雌性SD大鼠血管環(huán)為研究對(duì)象，不同濃度棕櫚酸和非諾貝特孵育，觀察棕櫚酸和非諾貝特對(duì)乙酰膽堿（ACh）誘導(dǎo)的血管舒張反應(yīng)的影響。將體外培養(yǎng)的MAEC分為正常對(duì)照組（CON）

4、，4-PBA組（PBA），棕櫚酸組（PA），4-PBA+棕櫚酸組（PA），棕櫚酸+非諾貝特酸干預(yù)組（FA+PA），衣霉素陽(yáng)性對(duì)照組（TM），MTT法研究棕櫚酸組和非諾貝特酸組細(xì)胞活力變化；硝酸還原酶法檢測(cè)非諾貝特對(duì)棕櫚酸作用后培養(yǎng)液NO生成的變化；RT-PCR分析各組CHOP，GRP78，IRE1α和XBP1-s基因水平變化；Western blot法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物CHOP、GRP78的蛋白表達(dá)以及ERK、ERK磷酸化，JNK、J

5、NK磷酸化和eNOS和eNOS的磷酸化變化。
　　結(jié)果：
　　1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分：5個(gè)月HFD飲食后，與對(duì)照組比較①HFD組大鼠體重明顯高于SCD組；②HFD組大鼠血清TC、TG、LDL-C顯著增高，HDL-C顯著降低；③HFD組大鼠血清FFA、PA水平顯著高于正常組；④HFD組血清NO水平顯著高于對(duì)照組；⑤HE及Weigert染色顯示：HFD組胸主動(dòng)脈管壁增厚，彈力纖維排列紊亂，局部有斷裂現(xiàn)象；⑥油紅O染色提示HFD組血管脂

6、質(zhì)生成顯著增加；⑦HFD組胸主動(dòng)脈組織CHOP和GRP78基因表達(dá)顯著增加；⑧CHOP、GRP78、ERK磷酸化及JNK磷酸化表達(dá)明顯高于SCD組，eNOS磷酸化表達(dá)顯著降低；⑨HFD組胸主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性血管舒張反應(yīng)顯著降低；⑩非諾貝特灌胃治療2個(gè)月，與HFD組相比，顯著降低大鼠體重，逆轉(zhuǎn)血脂水平改變，明顯改善胸主動(dòng)脈病理學(xué)變化，CHOP和GRP78基因表達(dá)顯著降低，各蛋白表達(dá)CHOP、GRP78、p-ERK、p-JNK明顯降低，p-e

7、NOS顯著增加；舒張反應(yīng)明顯改善。
　　2.體外實(shí)驗(yàn)部分：與CON組相比，①不同濃度PA作用正常雌性SD大鼠血管環(huán)3 h后，內(nèi)皮依賴性血管舒張變化明顯減弱，以0.2mmol/L PA減弱最為明顯；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4-PBA或FA預(yù)處理后，血管環(huán)舒張反應(yīng)明顯改善；TM孵育血管環(huán)90min后，舒張反應(yīng)顯著降低②不同濃度PA對(duì)MAEC活力明顯減弱，以0.5mmol/L PA作用24h最明顯；③PA處理顯著減少細(xì)胞上清液NO的水平，F(xiàn)A孵

8、育后逆轉(zhuǎn)PA作用下NO水平變化；④PA顯著誘導(dǎo)CHOP、GRP78、IRE1α、XBP1-s基因表達(dá)；⑤ CHOP、GRP78、p-ERK、p-JNK表達(dá)顯著增加，p-eNOS表達(dá)顯著降低；⑥內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4-PBA或FA預(yù)處理后，各基因表達(dá)顯著降低，CHOP、GRP78、p-ERK、p-JNK蛋白表達(dá)明顯降低，p-eNOS顯著增加；⑦內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激陽(yáng)性對(duì)照物TM組CHOP、GRP78基因和蛋白水平均明顯升高。
　　結(jié)論：