劇烈運動誘導(dǎo)小鼠肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的炎癥損傷及槲皮素的干預(yù).pdf

1、目的：探討槲皮素干預(yù)對劇烈運動誘導(dǎo)的肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和炎癥的保護效應(yīng)；探討槲皮素拮抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的炎癥損傷的潛在機制和信號通路。
　　方法：
　　1.40只成年健康雄性BALB/c小鼠按體重隨機均分四組，安靜對照組、劇烈運動組、劇烈運動+槲皮素組（100 mg/kg.bw）、安靜+槲皮素組（100 mg/kg.bw）。
　　2.采用二步膠原酶法分離培養(yǎng)小鼠原代肝細胞，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)炎癥的關(guān)鍵信號分子抑

2、制劑孵育小鼠原代肝細胞12h。
　　結(jié)果：
　　1.與安靜對照組比較，劇烈運動引起肝臟超微結(jié)構(gòu)異常，血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase， ALT）水平升高，肝臟腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素—6（Interleukin-6，IL-6）和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（gluco

3、se-regulated protein， GRP78）蛋白表達增加；槲皮素干預(yù)有效緩解劇烈運動引起的肝臟超微結(jié)構(gòu)異常、轉(zhuǎn)氨酶的釋放、炎癥損傷和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平。
　　2.與安靜對照組相比，劇烈運動降低小鼠肝臟磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide3-kinases，PI3K）和磷酸化的蛋白激酶B（protein kinase B， Akt）蛋白表達，伴隨內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中鈣離子濃度的下降；槲皮素干預(yù)增加劇烈運動組小鼠肝臟PI3

4、K、p-Akt的蛋白表達和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中鈣離子濃度。
　　3.毒胡蘿卜素（thapsigargin，Tg）增加小鼠原代肝細胞GRP78蛋白表達和炎癥因子（IL-6和TNF-α）的釋放；槲皮素預(yù)處理Tg孵育的肝細胞，明顯降低GRP78蛋白水平，抑制IL-6、TNF-α的釋放；Tg孵育小鼠原代肝細胞經(jīng)槲皮素干預(yù)同時給以PI3K抑制劑LY294002處理，部分抵消槲皮素對Tg誘導(dǎo)GRP78蛋白表達以及炎性因子（IL-6和TNF-α）釋放水平的

5、抑制效應(yīng)。
　　4.槲皮素和Tg聯(lián)合孵育小鼠原代肝細胞分別經(jīng)AEBSF和SP600125單獨或聯(lián)合處理，顯著降低上清液中IL-6的水平；AEBSF對TNF-α無明顯影響， SP600125未進一步地阻斷槲皮素和Tg聯(lián)合孵育肝細胞IL-6的釋放；PDTC單獨或聯(lián)合AEBSF和SP600125均顯著抑制IL-6和TNF-α的釋放；三種抑制劑聯(lián)合處理進一步降低槲皮素和Tg聯(lián)合孵育肝細胞釋放IL-6和TNF-α的水平。
　　5.與安

6、靜對照組相比，劇烈運動誘導(dǎo)小鼠肝臟核因子-κB（nuclear factor-κB， NF-κB）亞基 p65和p50核轉(zhuǎn)位，核蛋白表達水平升高；槲皮素干預(yù)部分抑制劇烈運動對p65和p50核轉(zhuǎn)位的促進作用。
　　結(jié)論：槲皮素對劇烈運動誘導(dǎo)的肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和炎性損傷具有良好的保護效應(yīng)；槲皮素通過上調(diào)PI3K/Akt保護肝細胞免受劇烈運動/Tg誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)；在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)炎癥的信號通路中，JNK和激活的轉(zhuǎn)錄因子