萬汶對缺血再灌注后心功能的影響及其機制的研究.pdf

1、本課題利用心肌I/R大鼠模型，研究萬汶對大鼠心肌I/R損傷的心肌功能及病理學(xué)的影響，并進一步探討其可能的分子機制。 目的： 1.通過研究大鼠心肌I/R(1h、2h、3h)不同組別血流動力學(xué)的變化；不同組別心肌梗死面積變化，以及心肌組織病理及超微結(jié)構(gòu)改變，探討萬汶對大鼠心肌I/R損傷的影響。 2.通過研究大鼠心肌I/R后血漿腫瘤壞死因子(TNF-a)、 IL-1B的濃度變化，心肌NF-кB以及血管內(nèi)皮黏附分子-1(

2、ICAM-1)mRNA的表達變化特征的影響，探討萬汶對心肌I/R炎癥反應(yīng)的影響。 3.通過研究大鼠心肌I/R后細(xì)胞凋亡的變化，探討萬汶對凋亡的干預(yù)作用，為應(yīng)用萬汶預(yù)防I/R損傷提供理論依據(jù)。 方法： 1.選取健康SD大鼠，參照相關(guān)文獻<'[44]>，制備心肌I/R模型。 2.將動物分組，分為假手術(shù)組(S組，n=10)，缺血-再灌注組(IR組，n=12)，白蛋白-缺血-再灌注組(A-IR組，n=12)，萬汶

3、-缺血-再灌注組(V-IR組，n=12)。IR組、A-IR組和V-IR組分別從股靜脈以0.2ml/min持續(xù)泵入7.5ml/Kg的0.9％氯化鈉溶液、5％白蛋白或萬汶。各組均作心室和股動脈插管，監(jiān)測記錄平均動脈壓(MAP)、心率(HR)、左室收縮峰壓(LVSP)、左室內(nèi)壓力變化最大速率(±dp/dt<,max>)，以評價心肌功能。再灌注結(jié)束處死大鼠，一部分行TTC染色法測定心肌梗死面積，一部分則在電鏡下觀察心肌組織病理學(xué)改變及超微結(jié)構(gòu)的

4、變化。 3.再灌注結(jié)束后頸動脈采血，比色法測定髓氧化物酶(MPO)含量；雙抗體夾心ELISA法測定TNF-a、IL-1B水平；ELISA法測定NF-кB的活性；real time PCR法大鼠心臟組織ICAM-1mRNA表達量。 4.各組取心肌組織作免疫組化檢測半胱天冬蛋白酶-3(caspase-3)的陽性表達及TUNEL法分析細(xì)胞凋亡指數(shù)。 結(jié)果： 1.各組之間基礎(chǔ)值無差異，缺血后各組相應(yīng)時間點的HR、

5、MAP、LVSP和±dp/dt<,max>在V-IR組均高于IR組和A-IR組(P<0.05)，但三組的這些參數(shù)值均低于S組(P<0.05)，IR組，A-IR組相應(yīng)時間點的HR、MAP、LVSP和±dp/dt<,max>無顯著差異(P>0.05)；各組之間AR/ALV值無顯著差異(P>0.05)，說明各組之間套扎部位相同，具有可比性。與m組、A-IR組比較，萬汶均可使IS/ALV、IS/AR值減少(P<0.05)，IR組、A-IR組比較

6、無顯著差異(P>0.05)；電鏡顯示：萬汶可使心肌肌絲部分輕度溶解，線粒體空泡變性少見。 2.各組再灌注180min，MPO活性在m組、A-IR組和V-IR組顯著高于S組(P<0.05)，其活性在V-IR組顯著低于IR組和A-IR組(P<0.05)。各組血清TNF-a、IL-1B明顯比S組升高(P<0.05)；心肌NF-кB活性在損傷各組也明顯升高，但萬汶可使TNF-a、lL-1B釋放減少，NF-кB活性降低。損傷各組的ICAM

7、-1 mRNA表達較S組顯著增多，而萬汶可使其表達較IR組和A-IR組減少。IR組和A-IR組的ICAM-1 mRNA表達量未見明顯差別。 3.各損傷組caspase-3陽性細(xì)胞率和細(xì)胞凋亡指數(shù)均顯著高于S組(P<0.05)。V-IR組陽性細(xì)胞率顯著低于IR組和A-IR組(P<0.05)，IR組和A-IR組陽性細(xì)胞率未見顯著差異。 結(jié)論： 1．大鼠心肌I/R后受到一定程度的損害，心肌收縮和舒張功能減退，萬汶可以早