超負荷血糖對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響及其機制的研究.pdf

1、第一部分 超負荷血糖對大鼠腦缺血再灌注過程中的損傷作用 目的：探討超負荷血糖對大鼠腦缺血再灌注過程中的損傷作用。 方法：用Wistar大鼠腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素，建立超負荷糖尿病大鼠模型后用線栓法做大鼠左側(cè)大腦中動脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對假手術(shù)組(A)、超負荷血糖組(B)、非超負荷血糖對照組(C)進行神經(jīng)功能缺失評分，用TTC染色法測量腦梗死體積，用干濕重法計算腦的含水量，應(yīng)用原位末端標記(TUNEL)

2、觀察腦缺血再灌注不同時間點神經(jīng)元凋亡的變化。 結(jié)論：腦缺血再灌注后，缺血周圍區(qū)神經(jīng)元的凋亡是一個動態(tài)的漸進過程。超負荷血糖在大鼠腦缺血再灌注過程中有明顯的損傷作用。 第二部分 超負荷血糖對大鼠腦缺血再灌注后CytCmRNA和Caspase-3mRNA表達的影響 目的：探討超負荷血糖對大鼠局灶性腦缺血再灌注后CytCmRNA和Caspase-3mRNA表達的影響。 方法：用線栓法制作大鼠左側(cè)大腦中動

3、脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對假手術(shù)組(A)、超負荷血糖組(B)、非超負荷血糖對照組(C)進行神經(jīng)功能缺失評分，用TTC染色法測量各層面腦梗死面積的百分比，應(yīng)用原位雜交技術(shù)分別觀察腦缺血再灌注不同時間點CytCmRNA和Caspase-3mRNA的表達。 結(jié)論：腦缺血再灌注后，缺血周圍區(qū)的神經(jīng)元內(nèi)CytCmRNA和Caspase-3mRNA均高表達，二者在局灶性腦缺血再灌注損傷中起重要作用。超負荷血糖明顯加重了大鼠腦缺血再

4、灌注損傷，超負荷血糖可能通過增加CytCmRNA和Caspase-3mRNA的表達這一途徑來加重腦缺血再灌注損傷。 第三部分 超負荷血糖對大鼠腦缺血再灌注損傷后bcl-2和bax表達的影響 目的:探討超負荷血糖對腦缺血再灌注損傷大鼠腦細胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白bax、bcl-2表達的影響。 方法:用Wistar大鼠腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素，建立超負荷糖尿病大鼠模型后做左大腦中動脈腦缺血再灌注模型。然后對大鼠進行腦

5、梗死體積計算并且采用免疫組織化學(xué)方法檢測超負荷血糖大鼠和正常大鼠腦缺血3h再灌注24小時bax、bcl-2的表達，同時采用TUNEL法原位標記DNA片段，檢測TUNEL陽性細胞的變化，并與假手術(shù)正常對照組比較。 結(jié)論:超負荷血糖加重了大鼠腦缺血再灌注損傷，超負荷血糖誘發(fā)的bax、bcl-2的表達異常促進了腦細胞的凋亡，可能是其加重腦缺血再灌注損傷的機制之 第四部分 超負荷血糖對大鼠腦缺血再灌注后MMP-2和MMP

6、-9表達的影響 目的：探討超負荷血糖對大鼠局灶性腦缺血再灌注后MMP-2和MMP-9表達的影響。 方法：用線栓法制作大鼠左側(cè)大腦中動脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對假手術(shù)組、超負荷血糖組、非超負荷血糖組進行腦含水量及EB含量的測定，用免疫組化技術(shù)分別觀察腦缺血再灌注后不同時間點MMP-2和MMP-9的表達。 結(jié)論：腦缺血再灌注后，病變區(qū)MMP-2和MMP-9表達增加，二者與腦缺血再灌注后腦水腫有關(guān)。超負荷血糖

7、可能通過增加MMP-2和MMP-9的表達這一途徑來加重大鼠腦水腫，對腦缺血再灌注損傷起重要作用作用。 第五部分 超負荷血糖對大鼠腦缺血再灌注后uPA及uPAR表達的影響 目的：探討超負荷血糖對大鼠局灶性腦缺血再灌注后uPA及uPAR表達的影響。方法：用線栓法制做大鼠左側(cè)大腦中動脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對假手術(shù)組、超負荷血糖組、非超負荷血糖組進行神經(jīng)功能缺失評分，用TTC染色法測量腦梗塞體積，采用免疫組織

8、化學(xué)和RT-PCR的方法檢測超負荷血糖大鼠和正常大鼠腦缺血3h再灌注24小時uPA(尿激酶型纖溶酶原激活物)、uPAR(尿激酶型纖溶酶原激活物受體)的表達，并與假手術(shù)組比較。結(jié)果：超負荷血糖組大鼠神經(jīng)功能缺失評分明顯高于非超負荷血糖組，超負荷血糖組梗死面積明顯大于非超負荷血糖組；同時，超負荷血糖組uPA、uPAR的表達明顯高于非超負荷血糖組。結(jié)論超負荷血糖加重了大鼠腦缺血再灌注損傷，超負荷血糖誘發(fā)的uPA、uPAR的表達增高可能是其加重