抗老年癡呆癥藥“定志小丸”的研制和遠志酸及其類似物的分離.pdf

1、隨著我國社會已進入人口老齡化階段，老年癡呆癥(AD)的發(fā)病率也逐年增高，目前，全世界老年性癡呆癥患者人約有5000萬人，并且不斷趨于年輕化，該病的病因目前尚無確切定論，發(fā)病機理有多種假說，老年性癡呆癥不僅是一個醫(yī)學(xué)難題，而且將成為一個突出的社會問題。 “定志小丸”(DX-9386)源于唐代藥王孫思邈的《備急千金方》。處方由人參、茯苓、石菖蒲和遠志四味中藥組成，四藥合用，共奏補養(yǎng)心脾、祛痰化濕、益智定志之功，為中醫(yī)治療老年癡呆癥的

2、基礎(chǔ)方劑。原方為大蜜丸劑，日服用量大，不便服用，采用現(xiàn)代工藝方法，對其進行了中藥現(xiàn)代化研究。 現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，方中藥材起作用的有效成分為人參皂苷、遠志皂苷、人參多糖、茯苓多糖和石菖蒲的揮發(fā)油等成分。根據(jù)這些成分的性質(zhì)，結(jié)合祖國中醫(yī)理論，我們以總多糖和總皂苷的含量為指標(biāo)，結(jié)合藥理實驗結(jié)果，通過L<,9>(3)<'4>正交試驗，確立了“定志小丸”的提取工藝，并利用醇沉和大孔樹脂柱層析進行純化，降低了出膏率，最大限度地提出了有效成

3、分，提高了有效成分的含量，制定了穩(wěn)定可控的工藝控制指標(biāo)，并進行了初步的藥效學(xué)試驗。 遠志酸是2005年版中國藥典遠志含量測定的法定對照品，但目前國內(nèi)無對照品供應(yīng)。為制定“定志小丸”質(zhì)量標(biāo)準的需要，從遠志總皂苷的水解產(chǎn)物中分離得到了遠志酸及其三個類似物，經(jīng)光譜鑒定與遠志酸結(jié)構(gòu)一致，純度檢查含量均在98％以上，達到了中藥對照品要求。 目的：研究“定志小丸”的提取純化工藝，制定工藝質(zhì)量控制標(biāo)準，進行初步的藥效學(xué)試驗。遠志藥材水

4、解產(chǎn)物的分離，制備遠志酸對照品，為新藥申報提供對照品。 方法： 第一部分 ①“定志小丸”提取工藝研究：按照中國藥典(2005年版、)標(biāo)準，選用合格藥材，通過單因素對比試驗，確定石菖蒲揮發(fā)油提取條件；以總多糖、總皂苷、出膏率及藥效學(xué)結(jié)果為評價指標(biāo)，進行綜合評分，確定提取溶劑；在全方提取條件優(yōu)化中首先通過單因素試驗考察提取次數(shù)，然后通過L<,9>(3<'4>)正交試驗，考察提取時間、溶劑倍數(shù)和稀醇濃度的影響，最終確定

5、最佳工藝參數(shù)。 ②“定志小丸”除雜工藝研究：通過L<,9>(3<'4>)正交試驗優(yōu)化醇沉條件，對“定志小丸”提取液進行第一次醇沉除雜；通過大孔樹脂動態(tài)吸附試驗，選擇大孔樹脂型號，考察大孔樹脂吸附容量、上樣濃度、洗脫溶劑及溶劑用量，確定大孔樹脂純化工藝參數(shù)，利用大孔樹脂對醇沉后的提取液進行二次除雜。 ③建立“定志小丸”提取、除雜工藝質(zhì)量控制指標(biāo)：可見-紫外分光光度法測定總多糖和總皂苷。 ④“定志小丸”初步藥效學(xué)試驗

6、：以小鼠跳臺試驗和生化指標(biāo)SOD、AChE、MDA為指標(biāo)，評價提取物對老齡小鼠的抗氧化、益智作用。 第二部分 單體成分的提取、分離和結(jié)構(gòu)鑒定：遠志藥材用稀醇提取，正丁醇萃取，大孔吸附樹脂富集得到總皂苷，總皂苷酸水解后，用硅膠色譜柱、制備液相等方法分離得單體化合物，利用UV、NMR、MS等波譜鑒定技術(shù)，確定單體化合物結(jié)構(gòu)。 結(jié)果： 第一部分 ①提取工藝條件：石菖蒲揮發(fā)油最佳提取條件為8倍量的水浸泡1

7、2小時，水蒸氣蒸餾提取6小時，用石油醚(60-90℃)萃取，石菖蒲揮發(fā)油可提取完全；全方最佳提取工藝為以8倍量50％乙醇回流提取2次，每次1.5小時。 ②最佳除雜條件：將“定志小丸”提取液濃縮到1g生藥/mL，加95％乙醇至含醇量為75％，進行醇沉，醇沉上清液濃縮到0.4g生藥/mL，上D101大孔樹脂柱進行二次除雜，分別用水、30％和60％醇進行梯度洗脫，收集水和60％醇洗脫液部分，減壓濃縮。 ③提取、除雜工藝質(zhì)量控制

8、方法：用紫外-可見分光光度法測定的指標(biāo)成分總多糖和總皂苷能充分反映方中有效成分含量和產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，方法簡單、可靠、可控。 ④藥效學(xué)試驗表明，“定志小丸”提取物可以明顯減少小鼠跳臺試驗的錯誤次數(shù)，延長潛伏期，生化指標(biāo)SOD、AChE、MDA測定結(jié)果表明具有統(tǒng)計學(xué)意義。 第二部分 從遠志皂苷水解產(chǎn)物中分離得到了四個單體化合物，經(jīng)波譜分析鑒定，化合物的結(jié)構(gòu)分別為：化合物Ⅰ為遠志酸，化合物Ⅱ為遠志皂苷元，化合物Ⅲ為遠志