重組人乙酰膽堿受體γ亞單位蛋白誘導(dǎo)HLA-DQ8轉(zhuǎn)基因小鼠實驗性自身免疫性眼肌型重癥肌無力的初步研究.pdf

1、目的： 利用HLA-DQ8轉(zhuǎn)基因小鼠建立實驗性自身免疫性眼肌型重癥肌無力(oEAMG)模型，并探討oEAMG免疫學(xué)發(fā)病機制。 方法： HLA-DQ8轉(zhuǎn)基因小鼠18只，隨機平均分成對照組和實驗組，實驗組小鼠分別用乳化于完全弗氏佐劑的E.coli質(zhì)粒表達重組人乙酰膽堿受體(H-AChR)γ亞單位20μg于0天免疫，乳化于不完全弗氏佐劑的重組H-AChR γ亞單位于30天和60天強化免疫，對照組用PBS代替H-AChR

2、γ亞單位進行初次和強化免疫，眼部癥狀根據(jù)單眼或雙眼的上瞼下垂程度評估，全身肌力改變使用握力器評估，第二次免疫后第15天和45天收集小鼠血清，放射免疫分析法(RIA)和酶聯(lián)免疫吸附實驗(EL,ISA)檢測小鼠血清中抗AChR抗體水平，并用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)檢測各組小鼠眼外肌中AChRα、γ和ε亞單位mRNA表達變化。 結(jié)果： (1)實驗組小鼠單眼或雙眼均出現(xiàn)不同程度的上瞼下垂癥狀，眼部癥狀評分明顯高于對照

3、組(P<0.001)，實驗組oEAMG發(fā)病率為89％，明顯高于對照組(P<0.001)；(2)第二次免疫后第6周開始，實驗組小鼠肌肉握力明顯降低，差異有顯著性(第6、7周P值分別等于0.009、0.0191)；(3)第二次免疫后第15、45天，RIA結(jié)果顯示實驗組血清中抗-AchR抗體水平均明顯高于對照組(P均<0.01)，EIJSA結(jié)果顯示實驗組血清中抗-AchR抗體(IgM、IgG、Ig2b、Ig2c、IgGl)水平均明顯高于對照組

4、(P均<0.01)；(4)與對照組相比，RT-PCR結(jié)果顯示實驗組AChR α、γ和ε亞單位mRNA表達明顯增強(P值均<0.01)。 結(jié)論： 重組H-AChR亞單位免疫后能誘發(fā)HLADQ8轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)生oEAMG?？?AChR抗體在oEAMG發(fā)病機理中起重要作用，參與oEAMG的發(fā)生與發(fā)展。重組H-AChR γ亞單位的免疫原性誘導(dǎo)的自身免疫應(yīng)答破壞眼外肌AChR，啟動AChR基因轉(zhuǎn)錄的上調(diào)機制，免疫后小鼠眼外肌(EMO