異煙肼緩釋微球治療家兔膝關(guān)節(jié)滑膜結(jié)核的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：制備異煙肼PLGA緩釋微球，考察其外觀形態(tài)、粒徑分布、載藥量、包封率等一般性質(zhì)，研究異煙肼緩釋微球在家兔膝關(guān)節(jié)內(nèi)的釋藥特性及組織相容性，并將異煙肼緩釋微球應(yīng)用到家兔膝關(guān)節(jié)滑膜結(jié)核模型中，就其對(duì)關(guān)節(jié)滑膜結(jié)核的治療作用進(jìn)行初步探討，為其臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)。 方法：(1)通過復(fù)乳法制備異煙肼PLGA緩釋微球，使用掃描電鏡及激光粒度分布儀觀察微球形態(tài)并測(cè)定其粒徑分布；考察微球載藥量、包封率等指標(biāo)；并以PBS液為體外降解介質(zhì)，采用高效

2、液相色譜法(HPLC)初步研究異煙肼緩釋微球體外釋藥特性。(2)將異煙肼緩釋微球注射入家兔膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)，采用高效液相色譜法測(cè)定不同時(shí)段家兔血漿、滑膜及臟器組織勻漿中的異煙肼藥物濃度，研究異煙肼緩釋微球在家兔關(guān)節(jié)內(nèi)給藥后的釋藥特性；并觀察異煙肼緩釋微球關(guān)節(jié)內(nèi)注射后，關(guān)節(jié)滑膜及關(guān)節(jié)軟骨的組織學(xué)表現(xiàn)，了解異煙肼緩釋微球的組織相容性。(3)使用H37RV結(jié)核標(biāo)準(zhǔn)菌株對(duì)家兔膝關(guān)節(jié)囊的注射感染，構(gòu)建家兔膝關(guān)節(jié)滑膜結(jié)核模型。(4)將所制備的異煙肼緩釋微

3、球行關(guān)節(jié)腔局部注射給藥，應(yīng)用到已感染膝關(guān)節(jié)滑膜結(jié)核的家兔模型中，就其對(duì)關(guān)節(jié)滑膜結(jié)核的治療作用進(jìn)行初步探討。 結(jié)果：(1)采用復(fù)乳法制備的緩釋異煙肼PLGA緩釋微球，其表面光滑圓整，顆粒規(guī)則無粘連，微球大小較均勻，粒徑分布較窄；微球的平均載藥量為12.49±0.51％，平均包封率為45.37±1.63％；微球冷凍干燥后，再分散性良好，外形美觀；微球體外釋藥研究表明，其在4周內(nèi)的累積釋藥率為82.06％，釋藥過程較為平穩(wěn)，其體外釋藥

4、符合Weibull方程：lnln(1／1-O)=0.728lnt-1.8569，R<'2>=0.9984；在4周的釋藥時(shí)間內(nèi)，載藥微球所釋出的異煙肼濃度均能達(dá)到有效的結(jié)核菌殺菌濃度。(2)異煙肼緩釋微球關(guān)節(jié)腔給藥后，在滑膜組織中2h可達(dá)到峰濃度，此后下降較為緩慢，24h時(shí)仍可達(dá)到1.43±0.39μg／g的有效治療濃度，與同一時(shí)間的口服組及原藥組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。異煙肼緩釋微球局部給藥后，藥物在局部滑膜組織中的有效濃度持

5、續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，在14天時(shí)異煙肼濃度為0.56±0.11μg／g，仍高于有效殺菌濃度：在21天時(shí)異煙肼濃度為0.21±0.11μg／g，仍高于數(shù)倍最低有效抑菌濃度；其在72h，168h，336h，504h各時(shí)間點(diǎn)的藥物濃度要顯著高于口服組及原藥組，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

6、容性良好。 (3)使用H37Rv結(jié)核菌株對(duì)家兔膝關(guān)節(jié)囊進(jìn)行注射感染后，家兔膝關(guān)節(jié)逐漸腫脹；X線攝片檢查顯示膝關(guān)節(jié)囊有腫脹；磁共振檢查顯示關(guān)節(jié)腔積液，關(guān)節(jié)周圍軟組織腫脹；病理檢查可見結(jié)核桿菌；滑膜組織集菌培養(yǎng)有結(jié)核菌生長(zhǎng)；說明已成功構(gòu)建出家兔膝關(guān)節(jié)滑膜結(jié)核模型。此種模型構(gòu)建的方法簡(jiǎn)單，成功率高，重復(fù)性強(qiáng)，組內(nèi)病變程度較一致，為膝關(guān)節(jié)結(jié)核的病理學(xué)及藥效學(xué)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究奠定了一定基礎(chǔ)。(4)采用異煙肼PLGA緩釋微球?qū)彝孟リP(guān)節(jié)滑膜結(jié)核模型進(jìn)

7、行治療研究的結(jié)果顯示：異煙肼緩釋微球膝關(guān)節(jié)局部給藥后，對(duì)關(guān)節(jié)滑膜組織內(nèi)結(jié)核菌具有明顯的殺菌及抑菌效果，其較單獨(dú)給予異煙肼關(guān)節(jié)腔局部注射有著更好的治療效果，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并且，異煙肼緩釋微球膝關(guān)節(jié)局部給藥后，其滑膜標(biāo)本的陽(yáng)性培養(yǎng)率亦較異煙肼口服組標(biāo)本的陽(yáng)性培養(yǎng)率更低，在一定程度上亦說明異煙肼微球較異煙肼口服給藥對(duì)關(guān)節(jié)滑膜內(nèi)結(jié)核菌有著更好的殺菌與抑菌效果；但可能是由于標(biāo)本量較4、的緣故，故尚未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論：采用復(fù)乳法制備的異

8、煙肼PLGA緩釋微球，具有較好的藥劑學(xué)特性，微球體外釋藥4周內(nèi)釋出異煙肼藥物濃度均達(dá)到有效殺菌濃度；微球膝關(guān)節(jié)內(nèi)給藥后，14天內(nèi)釋出藥物濃度均高于有效殺菌濃度，21天內(nèi)均高于有效抑菌濃度；使用H37Rv結(jié)核菌株對(duì)家兔膝關(guān)節(jié)囊的注射感染可成功構(gòu)建出膝關(guān)節(jié)滑膜結(jié)核模型；異煙肼緩釋微球?qū)οリP(guān)節(jié)滑膜結(jié)核的治療效果要顯著優(yōu)于異煙肼局部給藥的方式；與異煙肼口服給藥比較，微球組標(biāo)本的陽(yáng)性培養(yǎng)率較口服組更低，在一定程度上說明其對(duì)關(guān)節(jié)滑膜內(nèi)結(jié)核菌較口服組