應(yīng)用高效液相色譜法研究冷保存再灌注損傷對(duì)大鼠移植肝膽汁酸代謝的影響.pdf

1、目的： 1．建立一種柱前衍生反相高效液相色譜(RP-HPLC)熒光檢測(cè)大鼠膽汁中游離與結(jié)合型膽汁酸的方法。 2．用RP-HPLC法檢測(cè)肝移植組和對(duì)照組大鼠術(shù)后14d內(nèi)膽汁中游離與結(jié)合型膽汁酸，從而探討經(jīng)歷冷保存再灌注損傷(CPRI)后移植肝膽汁中膽汁酸的變化規(guī)律，為臨床移植肝膽道并發(fā)癥的防治提供新的思路。 方法： 1．以BMC為熒光衍生劑、DCC為催化劑，對(duì)游離與甘氨結(jié)合膽汁酸進(jìn)行柱前衍生化。?；墙Y(jié)合膽汁

2、酸經(jīng)膽酰甘氨酸水解酶水解后，再進(jìn)行衍生化。 2．色譜條件：色譜柱：Waters Nova C18色譜柱(3.9×150 mm．5μm)；流動(dòng)相A：甲醇：乙睛=1:2(v/v)，B：超純水，梯度洗脫；柱溫：20℃；流速：1 mL/min；激發(fā)波長(λex)：330 nm，發(fā)射波長(λem)：400 nm。內(nèi)標(biāo)(月桂酸)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。檢測(cè)時(shí)間20min。 3．用Chromabond C18 ec固相小柱萃取膽汁樣品。

3、 4．用RP-HPLC法測(cè)定肝移植組(供肝冷保存時(shí)間分別為1h、12h)和對(duì)照組大鼠術(shù)后14d內(nèi)膽汁中游離與結(jié)合型膽汁酸。 結(jié)果： 1．各膽汁酸在5～2400μmol/L，范圍內(nèi)線性良好，r為0．9989～0.9997。最低檢出限為1.2～2.5 μmol/L。日內(nèi)精密度不超過3.67％，日間精密度均小于6.83％。平均回收率為87.8％～106.7％。 2．與對(duì)照組相比，肝移植組大鼠膽汁中疏水性膽汁酸TCA、

4、TDCA比重增加，親水性膽汁酸TUDCA、THDCA比重一過性增高，膽汁酸疏水指數(shù)(HI)上升顯著，且隨移植肝冷保存時(shí)間延長，HI升高越顯著。 結(jié)論： 1．本文建立的RP-HPLC法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)鼠膽汁中游離型與甘氨、?；墙Y(jié)合型膽汁酸的分離檢測(cè)，且方法的靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度均較高，分析時(shí)間短，線性范圍寬，適合于科研工作中對(duì)鼠膽汁中膽汁酸進(jìn)行定量檢測(cè)。 2．在經(jīng)歷冷保存/再灌注損傷(CPRI)后移植肝膽汁中疏水性膽汁