非標(biāo)記定量方法分析強直性脊柱炎患者髖關(guān)節(jié)韌帶部位的蛋白質(zhì)表達變化.pdf

1、強直性脊柱炎（Ankylosing spondylitis，AS）是一種自身免疫性疾病，以慢性炎癥及異常骨化為主要特征。由于AS病變部位樣本難以取得，現(xiàn)階段大多研究都采用AS患者的外周血及滑膜組織進行相關(guān)分析，對其發(fā)病機制的了解十分有限。為了研究AS發(fā)病機理尤其是它的骨化機制，本實驗選取了3個AS患者及3個正常股骨頸骨折病人的髖關(guān)節(jié)韌帶組織，利用HPLC-MS/MS技術(shù)鑒定其蛋白質(zhì)組成、利用非標(biāo)記定量技術(shù)對蛋白質(zhì)進行定量并進行生物信息學(xué)

2、分析。同時，將本實驗鑒定到的蛋白質(zhì)與同樣來自于AS髖關(guān)節(jié)韌帶組織的基因芯片數(shù)據(jù)篩選出的差異表達基因進行分析比較，以此確立一些更可靠的與AS發(fā)病相關(guān)的基因，為研究AS的發(fā)病機理及尋找其藥物靶點奠定基礎(chǔ)。
　　質(zhì)譜鑒定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，僅在AS病人中鑒定到的蛋白質(zhì)有415個，僅在對照中鑒定到的蛋白由116個，共同鑒定到的有716個。其中有許多與炎癥及骨化相關(guān)的蛋白如Collagen家族、SLC9A3R1、HIST2H2AC、TNFRSF11B

3、、ALPL、MMP13、TGFB1I1、ARL6IP5、COMP、TGFBI、CALM1、CALM2、MMP2、MMP3,CD44、SPTBN1、CA1等，提示它們在AS的發(fā)病過程中起著十分重要的作用。
　　非標(biāo)記定量(Label-free quantitation)結(jié)果顯示，當(dāng)P＜0.5時，共有149個差異表達蛋白，有83個上調(diào)表達，66個下調(diào)表達;其中，差異倍數(shù)＞2的具有顯著表達差異的蛋白質(zhì)共有27個，15個在AS病人中表達水

4、平升高，12個的表達水平下降。與基因芯片結(jié)果綜合比較發(fā)現(xiàn)，SLC9A3R1、KRT83、HIST2H2AC及RPL21在AS病人中上調(diào)表達，PDLIM3、ARPC5、GLUD1、GDI2、VIM、ACTG1在AS中下調(diào)表達。
　　通過GO系統(tǒng)分析，這些蛋白質(zhì)主要參與細(xì)胞粘附、骨骼系統(tǒng)形成、免疫反應(yīng)、鈣離子結(jié)合、細(xì)胞骨架、血管生成及炎癥反應(yīng)等生物學(xué)功能。通過KEGGPathway分析，鑒定的蛋白質(zhì)的信號通路主要包括骨化、炎癥反應(yīng)及細(xì)

5、菌感染等。通過STRING分析蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)發(fā)現(xiàn)，表達具有顯著差異的蛋白的互作網(wǎng)絡(luò)中心節(jié)點包括:COMP、ACTG1、FMOD、DCN，具有差異的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的中心節(jié)點包括:COL2A1、COL5A1、SPARC、TIMP1、LGALS3BP等。
　　綜上所述，本實驗主要利用質(zhì)譜技術(shù)及非標(biāo)記定量技術(shù)對AS的蛋白質(zhì)組進行定性和定量分析，然后利用生物信息學(xué)方法比較發(fā)病前后的細(xì)胞外基質(zhì)變化，挖掘與AS發(fā)病相關(guān)尤其是與骨化機制相關(guān)的關(guān)鍵