KLF4調(diào)控MMP9對原發(fā)性肝癌的侵襲遷移能力的影響.pdf

1、目的:
　　研究KLF4基因與MMP9基因在肝癌組織和肝癌癌旁組織中的表達情況，探討KLF4基因調(diào)節(jié)MMP9基因的表達變化對肝癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，探討肝細胞癌侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機制，腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的分子網(wǎng)絡，為肝癌轉(zhuǎn)移侵襲的治療提供理論基礎。
　　方法：
　　1、原發(fā)性肝癌病人癌和癌旁組織（距病灶2c m的組織）標本搜集后，通過免疫組化、qRT-PCR和WB檢測50例肝癌組織及對應癌旁組織中KLF4基因和MMP

2、9基因的表達。
　　2、質(zhì)粒(生物公司代為設計合成)轉(zhuǎn)染后，上調(diào)肝癌細胞HepG2中KLF4基因的表達，檢測MMP9基因mRNA及蛋白表達水平的變化；
　　3、運用Tra nswe ll侵襲實驗、劃痕實驗觀測轉(zhuǎn)染后Hep G2細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化。
　　4、統(tǒng)計分析采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件，正態(tài)分布、方差齊的測量數(shù)據(jù)，以?±s表示，用t檢驗做組間比較，用單因素方差分析做多組均數(shù)間比較，P＜0.05，說明差異具有

3、統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1、qRT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)肝癌組織標本中KLF4基因mRNA的表達較對應的癌旁組織標本更低（P＜0.05）；而MMP9 mRNA的表達較對應的癌旁組織標本更高（P＜0.05）。WB檢測肝癌組織KLF4蛋白表達低于癌旁組織；而MMP9蛋白的表達高于癌旁組織。
　　2、免疫組化檢測結果發(fā)現(xiàn)KLF4蛋白在76％（38/50）的病例肝癌組織呈低表達，而僅有10%（5/50）的癌旁組織中呈低表達；M

4、MP9蛋白在84%（42/50）的病例肝癌組織呈高表達，而僅有12%（6/50）的癌旁組織中呈高表達。
　　3、qRT-PCR和WB檢測發(fā)現(xiàn)過表達KLF4組中KLF4 mRNA和蛋白的表達較正常對照組和空白質(zhì)粒組明顯升高（P＜0.05），而正常對照組、空白質(zhì)粒組之間KLF4 mRNA表達量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。另外，過表達KLF4后，發(fā)現(xiàn)MMP9mRNA和蛋白的表達降低（P＜0.05）。
　　4、Transwel

5、l侵襲實驗顯示：相對于正常對照組和空白質(zhì)粒組，過表達KLF4組的細胞侵襲能力降低（P＜0.05）；劃痕試驗結果顯示：相對于正常對照組和空白質(zhì)粒組，過表達KLF4組細胞的劃痕愈合率明顯下降（P＜0.05）。
　　結論：
　　1、在原發(fā)性肝癌中，KLF4基因的表達明顯低于癌旁組織，而MMP9基因表達明顯高于癌旁組織。
　　2、在肝癌細胞HepG2中上調(diào)KLF4基因的表達可引起MMP9基因的表達下降，進而抑制肝癌細胞的侵襲和