四川紅景天的組織培養(yǎng)及其抗性基因表達(dá)情況的檢測.pdf

1、紅景天作為一種珍貴藏藥植物，因其具有清熱解毒和燥濕的功效，早期主要用于治療肺炎以及由傳染病引起的發(fā)燒和清血管熱，現(xiàn)認(rèn)為其還具有抗疲勞、抗衰老、抗缺氧、抗紫外線輻射等作用，是非常有開發(fā)前途的環(huán)境適應(yīng)性藥用植物。紅景天生長環(huán)境極其惡劣且多變，如缺氧、低溫干燥、狂風(fēng)、強(qiáng)紫外線照射、晝夜溫差大等，這使其具備了其它植物所罕有的特殊適應(yīng)性物質(zhì)，也導(dǎo)致其自然資源極其匱乏。紅景天種子繁殖相當(dāng)困難，由高山引種至低海拔地區(qū)進(jìn)行馴化栽培時(shí)病蟲害發(fā)生很嚴(yán)重，加

2、上人們大量地采挖其野生資源，使得其已瀕臨滅絕的境地。因此加強(qiáng)紅景天的組織培養(yǎng)及其快速繁殖，保護(hù)其自然資源及其遺傳多樣性極其迫切。
　　中國有紅景天屬植物73種，其中以云南、四川及西藏的種類最多，西藏有32種，四川省有22種?，F(xiàn)有不少關(guān)于云南和西藏紅景天的組織培養(yǎng)報(bào)道，但未見有關(guān)四川紅景天組織培養(yǎng)的報(bào)道。本研究首次對(duì)四川野生紅景天進(jìn)行組織培養(yǎng)，并成功獲得其愈傷組織和再生植株。在組織培養(yǎng)過程中，我們研究不同的取材時(shí)間、不同的外植體以及

3、不同的營養(yǎng)條件對(duì)紅景天愈傷組織誘導(dǎo)的影響、植物激素對(duì)愈傷組織的分化和生根培養(yǎng)等方面的影響，以及組織培養(yǎng)幾個(gè)時(shí)期抗性基因表達(dá)的情況。研究結(jié)果如下：
　　1.一年中最佳的取材時(shí)間是10月份，外植體成愈率最高，達(dá)到78％以上。
　　2.在大花紅景天愈傷組織誘導(dǎo)過程中，莖段顯示出比葉片更易于誘導(dǎo)愈傷組織。在長鞭紅景天愈傷組織培養(yǎng)過程中，葉片比莖段顯示出更易于誘導(dǎo)愈傷組織。
　　3.2,4-D與NAA比較，其能夠較早的啟動(dòng)愈傷化

4、，2,4-D啟動(dòng)愈傷化，只需要5d時(shí)間，而NAA啟動(dòng)時(shí)間至少需要10 d。2,4-D誘導(dǎo)出的愈傷組織結(jié)構(gòu)致密，高濃度(4mg/L)啟動(dòng)愈傷化需要時(shí)間更短。NAA誘導(dǎo)出的愈傷組織呈現(xiàn)淡黃綠色，而且結(jié)構(gòu)比較蓬松，活性強(qiáng)，很容易誘導(dǎo)分化出芽。用低濃度的2,4-D（2mg/L）和中等濃度的NAA(0.2mg/L)配合誘導(dǎo)愈傷組織，能夠較早啟動(dòng)愈傷化，且愈傷組織比較容易分化。植物激素6-BA2mg/L、NAA0.2mg/L、2,4-D2mg/L、

5、KT0.5mg/L)組合誘導(dǎo)出的愈傷組織最好，愈傷組織淡黃綠又有光澤，結(jié)構(gòu)蓬松，容易誘導(dǎo)出芽而且出芽多。
　　4.在植物激素和蔗糖的組合中，最佳的濃度組合是6-BA2mg/L，NAA0.2mg/L，蔗糖40g/L。高濃度的蔗糖有利于愈傷組織的分化。
　　5.檢測紅景天組織培養(yǎng)過程中各個(gè)階段的培養(yǎng)物的抗性基因表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)11個(gè)特異表達(dá)的基因，其中大部分基因與抗病性有關(guān)，3個(gè)基因未知其功能，這表明組織培養(yǎng)具有特殊的生理活動(dòng)。<

6、br>　　利用紅景天植物組織培養(yǎng)，我們除了可快速繁殖出大量的紅景天種苗及多種代謝物質(zhì)外，還可獲其大量的優(yōu)良無性系、單倍體、三倍體、多倍體及非整倍體，與細(xì)胞融合技術(shù)結(jié)合打破紅景天種屬間的界限，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性障礙，培育紅景天植物新品種和改良其種性。組織培養(yǎng)的植物細(xì)胞還是在細(xì)胞水平上分析研究的理想材料。因此通過紅景天的組織培養(yǎng)我們可以進(jìn)一步研究紅景天的生理學(xué)、遺傳學(xué)、育種學(xué)、胚胎學(xué)、解剖學(xué)、病理學(xué)、生物制藥、以及生物化學(xué)等方面，以期全面