防風(fēng)的組織培養(yǎng)及其生化分析.pdf

1、以防風(fēng)不同組織為外植體，通過誘導(dǎo)愈傷組織及其分化建立了再生體系，獲得如下結(jié)果：
　　 1.外植體：以種子、根、莖段、子葉和葉片為外植體均能誘導(dǎo)出愈傷組織，但在出愈率和愈傷生長(zhǎng)方面差異較大，其中莖段愈傷組織效果較好，是比較理想的外植體。
　　 2.培養(yǎng)基和激素配比：不同激素組合對(duì)愈傷組織的形成影響很大，其中生長(zhǎng)素2，4-D是愈傷組織形成的關(guān)鍵因素。最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2，4-D1.5mg.L-1+6-BA1.0mg.L-

2、1+KT0.5mg.L-1，最高誘導(dǎo)率可達(dá)96.7％。不同激素組合下愈傷組織均可增殖，在MS+6-BA1.0mg.L-1+NAA1.0mg.L-1培養(yǎng)基上，愈傷組織生長(zhǎng)迅速，呈黃綠色，質(zhì)地緊密，愈傷增殖倍數(shù)達(dá)5.2。這種繼代培養(yǎng)的愈傷組織在后期的分化過程中分化程度較高，是最佳繼代培養(yǎng)基。
　　 3.愈傷組織再分化：將生長(zhǎng)較好的愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上，愈傷組織逐漸變綠，并形成很多突起，進(jìn)而形成多芽體。篩選出最佳分化培養(yǎng)基為MS

3、+6-BA1.0mg.L-1+NAA0.5mg.L-1，分化率高達(dá)75.0％。
　　 4.再生苗生根培養(yǎng)：再生苗接種到生根培養(yǎng)基上15d后開始生根，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.5mg.L-1+6-BA0.2mg.L-1，生根率達(dá)65.0％，平均根數(shù)為16.3條。
　　 5.煉苗移栽：將生根苗在自然光下閉瓶煉苗2-3d，然后逐漸打開瓶蓋煉苗1-2d，讓小苗逐漸適應(yīng)外界條件后進(jìn)行移栽。移栽前基質(zhì)用0.1％多菌靈溶液

4、消毒。移栽最佳基質(zhì)為腐質(zhì)土：蛭石：河沙(1:1:1)，移栽成活率達(dá)到92.0％。
　　 6.試管苗的RAPD分析：對(duì)由同一莖段愈傷組織分化培養(yǎng)出的15株生長(zhǎng)良好的試管苗和對(duì)照進(jìn)行RAPD分析，200個(gè)隨機(jī)引物中有一個(gè)引物(S4)在植株6中擴(kuò)增出一個(gè)大小為640bp左右的穩(wěn)定多態(tài)性片段。結(jié)果說(shuō)明組織培養(yǎng)可以很好的保持防風(fēng)的遺傳特性，但同時(shí)也可能導(dǎo)致DNA分子的改變，產(chǎn)生了遺傳變異。
　　 7.培養(yǎng)條件與玻璃化：外源激素、瓊

5、脂濃度和光強(qiáng)對(duì)其組織培養(yǎng)過程中的玻璃化苗產(chǎn)生的影響明顯。細(xì)胞分裂素6-BA的濃度過高、瓊脂濃度過低、弱光照強(qiáng)度極易導(dǎo)致防風(fēng)試管苗玻璃化。
　　 8.玻璃苗與正常苗過氧化物酶同工酶：結(jié)果表明玻璃苗與正常苗相比少了活性較高的Rf0.150、Rf0.179、Rf0.300三條帶，但多了活性較高的Rf0.140、Rf0.147、Rf0.156、Rf0.182四條帶及兩條次生帶。究其原因：一是可能某結(jié)構(gòu)基因山多啟動(dòng)子調(diào)控，玻璃化導(dǎo)致了結(jié)構(gòu)